BCMA CAR-T

BCMA CAR-T细胞治疗显著改善了复发或难治性多发性骨髓瘤（RRMM）的生存。MRD阴性已成为预测良好预后的强指标，也是新药加速审批的替代终点，下一代基因测序（NGS）和下一代流式细胞术（NGF）是目前最常用的MRD检测方法，分别具有约10^-6和10^-5的灵敏度。但研究者在临床实践中发现，在部分接受BCMA CAR-T治疗的患者中，NGS-MRD可检测到一种与原始肿瘤克隆无关的新型克隆序列，且该克隆在治疗后持续存在。

中国医学科学院血液病医院（中国医学科学院血液学研究所）安刚/贾玉娇/邱录贵团队近日《American Journal of Hematology》发表文章，首次报道了接受eque-cel治疗的患者中，二代测序-微小残留病（NGS-MRD）可持续检测到序列一致的全新克隆。该克隆并非源自肿瘤残留或继发性肿瘤，而是源自CAR-T产品的scFv结构片段。中国医学科学院血液病医院（中国医学科学院血液学研究所）安刚主任医师、贾玉娇助理研究员和邱录贵主任医师为共同通讯作者，博士研究生严文强、常娇主管技师和杜辰星主治医师为共同第一作者。

研究方法&结果

研究方法：研究纳入55名在作者单位接受BCMA CAR-T细胞治疗的多发性骨髓瘤患者，这些患者至少接受了一次NGS-MRD评估。分别应用NGF和NGS评估患者MRD状态，其中NGS使用Neo检测法，针对IGH、IGK和IGL基因的V(D)J重排进行检测。使用ddPCR定量检测27份骨髓DNA样本中的慢病毒载体拷贝数（VCN）。此外，对P22患者的T4时间点（治疗后第28天）的骨髓单个核细胞进行单细胞RNA、BCR和TCR测序，以探索新型克隆的克隆起源。

新型克隆的出现：在55名患者中，有25名（45.5%）在CAR-T输注后出现了新型克隆。这些患者的中位年龄显著低于未出现新型克隆的患者（60岁 vs. 66岁，p=0.009），且所有出现新型克隆的患者均接受了伊基奥仑赛（eque-cel）（全人源BCMA CAR-T产品）治疗。

克隆动态：在20名接受至少两次连续NGS-MRD评估的患者中，所有患者在CAR-T输注后均清除基线肿瘤克隆。新型克隆在首次输注后的骨髓样本中同时出现，其丰度范围从10^-5到10^-3不等，最长持续时间为479天。

新型克隆的分子起源：通过对NGS-MRD原始数据的重新分析，发现所有出现新型克隆的患者共享一个相同的核苷酸序列，该序列与eque-cel CAR结构的单链可变片段（scFv）高度同源，具体映射到可变轻（VL）域的FR3-CDR3-FR4区域。

与CAR-T细胞持久性的关联：在27份可用的骨髓样本中，通过ddPCR检测到的VCN水平与NGS-MRD检测到的新型克隆丰度呈强相关性（R=0.88，p<0.001）。

单细胞分析：对P22患者的单细胞RNA、BCR和TCR测序结果显示，新型克隆序列与任何BCR或TCR序列均不匹配，从而排除其来自内源性T细胞或B细胞的可能性。CAR+ T细胞表现出多克隆和表型多样化的特征，没有证据表明存在转化或扩增偏差。

总结

核心发现：在接受全人源化BCMA CAR-T细胞疗法(伊基奥仑赛，eque-cel)的多发性骨髓瘤患者中，通过基于NGS的 MRD检测意外发现了一种持续存在的新型克隆序列。该克隆并非肿瘤来源，而是源自CAR-T产品中scFv的转基因序列，可能干扰MRD结果的解读。

临床意义: 

MRD解读的挑战：由于NGS-MRD依赖免疫球蛋白基因重排检测，人源化 CAR-T的scFv序列可能被误判为B细胞克隆，导致假阳性信号。这一现象在非人源化CAR-T(如ide-cel或cilta-cel)中未观察到。

CAR-T持久性的替代标志物：新型克隆的丰度与CAR-T载体拷贝数(VCN)高度相关(R=0.88)，提示NGS-MRD或可间接监测CAR-T体内存续，作为评估人源化CAR-T体内扩增的重要补充。

生物学验证：通过单细胞多组学分析(RNA-seg、BCR/TCR测序)证实，该克隆不与内源性B/T细胞克隆重叠，且CAR+T细胞呈现多克隆分布，排除了肿瘤转化或克隆性增殖的可能性。

实践建议:临床需警惕此类“分析假象”，避免误诊为疾病复发或继发肿瘤，同时强调了人源化CAR-T设计对MRD检测的影响，为未来CAR-T产品开发和MRD标准制定提供参考。

参考文献

Yan, W., Chang, J., Du, C., Liu, Y., Lv, R., Zou, H., Yu, T., Zhang, S., Wang, T., Sui, W., Deng, S., Xu, Y., Huang, W., Yi, S., Zou, D., Wang, J., Qiu, L., Jia, Y. and An, G. (2025), Identification of a CAR-Derived Clone by NGS-Based MRD After Fully Human BCMA CAR T-Cell Therapy in Multiple Myeloma. Am J Hematol. https://doi.org/10.1002/ajh.27732

Tags： 【AJH】安刚/贾玉娇/邱录贵团队首次发现全人源BCMA CAR-T治疗致NGS-MRD假阳性新克隆