类风湿性关节炎（RA）是一种以慢性全身性炎症为特征的疾病，常导致关节软骨和骨骼受损，并伴随着剧烈的关节疼痛。此外，RA显著提高了患者患有心脑血管疾病、代谢紊乱、癌症以及其他健康并发症的风险，对个人的整体健康构成了重大威胁。在RA的临床治疗中，主要的药物包括生物制剂和非甾体抗炎药。但这些药物包括显著的副作用、耐药性问题以及日益增长的医疗成本。因此，迫切需要一种安全且有效的治疗RA的方法。传统中药作为一种有前景的治疗途径，因其副作用较低、疗效持久以及能够整体调节身体机能的特点，为治疗RA提供了新的视角。

芍药甘草附子汤（SGFD）最早记载于东汉时期的《伤寒论》，该在缓解及治疗RA方面扮演了至关重要的角色。现代药理学研究揭示，SGFD能够通过TLR4/MAPKs/NF-κB信号通路抑制炎症反应，并减轻RA的症状。然而，过往的研究多依赖于中药成分数据库构建的网络，这种方法可能无法准确反映SGFD中实际的药理成分，从而影响了研究结果的可靠性。此外，SGFD在治疗RA方面的化学物质基础尚未得到充分和明确的阐释，因此亟需采用更为有效的研究方法，以提升研究的科学性和可信度。

日前，一篇名为“Network pharmacology combined with affinity ultrafiltration to elucidate the potential compounds of Shaoyao Gancao Fuzi Decoction for the treatment of rheumatoid arthritis”的文章揭示了SGFD潜在的治疗靶点和作用机制。

图1 论文首页

SGFD对关节炎指数评分、爪子厚度和体重的影响

研究构建了AIA（关节炎）大鼠模型，着重评估了21天治疗期间的关节炎指数评分、爪子厚度以及体重变化，从而验证了SGFD对RA的治疗效果（图2A-C）。相较于正常组，其他各组在AIA给药的第0天至第12天期间，关节炎指数评分和爪子厚度均呈现出不同程度的上升趋势。至治疗第21天，与模型组相比，SGFD（高剂量）组和MTX组的关节炎指数评分显著降低。同样，与正常组相比，AIA大鼠右后爪的厚度显著增加。

SGFD治疗后，大鼠右后肢爪的厚度自第12天起开始下降，至第21天，高剂量SGFD组和MTX组与模型组相比明显减少。在第12天，SGFD组（低剂量、中剂量）治疗组的体重有所下降，而SGFD（高剂量）组和MTX组的体重则持续增加，与模型组相比存在显著的统计学差异。综合关节炎相关参数的评估结果表明，SGFD在改善AIA大鼠模型中与类风湿性关节炎相关症状方面具有显著功效。

图2 SGFD的体内疗效评价

形态学、组织病理学和免疫荧光分析

正常组大鼠的右后爪呈现出薄而细的外观特征，而模型组大鼠则呈现出显著的红肿现象。在施以SGFD和MTX治疗后，RA症状在不同程度上有所缓解，尤其在SGFD高剂量组和MTX组中表现更为明显（图2D）。HE关节组织染色结果显示，与正常组相比，模型组大鼠的关节软骨组织受损、滑膜增生以及炎症细胞的大量浸润现象更为突出。药物治疗后，RA的病理状况得到了显著改善（图2E）。结果表明，SGFD具有修复AIA大鼠受损关节组织的潜力，并对RA潜在病理过程具有治疗作用。

图2F展示了TNF-α在大鼠膝关节滑膜和软骨组织中的表达水平。值得注意的是，与对照组相比，模型组的TNF-α水平显著升高，表明AIA模型构建成功。SGFD的应用导致TNF-α表达逐渐降低，表明SGFD对TNF-α具有有效的抑制作用。同时，MTX组的TNF-α表达水平与对照组相近，这进一步证实了治疗效果的显著性。

SGFD对血清炎性细胞因子水平的影响

ELISA染色结果显示，大鼠血清中TNF-α、IL-6及IL-1β的表达水平相较于正常组，模型组大鼠血清中上述三种指标的水平显著升高，从而验证了AIA模型的成功构建（图2G-I）。继而观察到，与模型组相比，SGFD组和MTX组在TNF-α、IL-6及IL-1β水平上均显示出下降趋势。这一结果揭示了SGFD和MTX在抑制炎症反应方面的显著效果。

SGFD对RAW 264.7细胞的抗炎作用

研究还通过体外实验，利用RAW264.7细胞评估了SGFD通过抑制NF-κB通路所展现的抗炎特性。首先，采用CCK-8方法对SGFD对细胞活力的影响进行了评估，结果表明在3.2 mg/mL的浓度范围内，SGFD能够促进细胞增殖而不引发毒性（图3A）。接着，通过在RAW264.7细胞中使用1μg/mL的LPS诱导炎症反应。以一氧化氮（NO）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作为评估指标，观察SGFD的抗炎效果。如图3B-C所展示，LPS诱导导致NO和TNF-α的产生增加，这反映了细胞的炎症状态。经过不同浓度的SGFD处理后，NO和TNF-α水平呈现出剂量依赖性的降低。特别值得注意的是，在3.2mg/mL的SGFD浓度下，NO的抑制率达到了81%。此外，与模型组相比，3.2mg/mLSGFD剂量组的TNF-α含量显著减少。

此外，研究还探讨了SGFD对RAW264.7细胞中NF-κB通路激活的影响（图3D-E）。LPS诱导导致IκBα的磷酸化，而SGFD处理后，这种磷酸化表现出剂量依赖性的降低。通过显微镜观察进一步发现，SGFD阻碍了LPS诱导的RAW264.7细胞中NF-κB/p65蛋白的核易位。总体而言，观察到的IκBα磷酸化和NF-κB/p65核易位的减少有助于深入理解RAW264.7细胞中SGFD抗炎特性的分子机制。

图3 SGFD对LPS诱导的RAW264.7细胞的抗炎作用和抑制下游NF-κB介导的炎症信号通路

结论

总之，研究开辟了一种创新的方法论，揭示了中药化合物在药效物质基础方面的全新视角。以SGFD治疗RA为例，通过针对AIA大鼠和RAW264.7细胞的药理学研究，发现SGFD展现出显著的抗RA及抗炎功效。

参考文献：

Fu W, Shentu C, Chen D, Qiu J, Zong C, Yu H, Zhang Y, Chen Y, Liu X, Xu T. Network pharmacology combined with affinity ultrafiltration to elucidate the potential compounds of Shaoyao Gancao Fuzi Decoction for the treatment of rheumatoid arthritis. J Ethnopharmacol. 2024 Aug 10;330:118268. doi: 10.1016/j.jep.2024.118268

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