中风是一种较为严重的公共卫生问题，每年导致约550万人离世，以及1370万人遭受残疾。而缺血性卒中（IS）是由于血管内血栓形成，导致脑部血液供应受阻。尽管在预防和治疗方面取得了一定进展，但IS仍然给患者和社会带来了沉重的医疗和经济负担。当前治疗的核心目标是迅速恢复脑部血流，溶栓和机械取栓疗法。然而，这些治疗手段常受限于出血风险以及缺血-再灌注（I/R）损伤，对患者的康复构成了重大障碍。因此，研发新的治疗策略显得尤为关键。

近年来，免疫炎症级联反应因其在IS发生发展中的作用而备受关注。由于血脑屏障（BBB）的存在，大脑缺乏淋巴引流和抗原提呈细胞，使其成为一个与身体其他部分隔离的免疫特权器官。然而，IS破坏了BBB的完整性，允许外周免疫细胞浸润损伤区域。这些浸润细胞有助于先天和适应性免疫反应，引发广泛的神经炎症反应。适应性免疫系统在中风后的免疫反应中起着关键作用，CD4+T细胞是关键介质。

黄连解毒汤（HLJDT）由黄连、黄芩、黄柏、栀子四味药材组成，具有清热解毒之效。研究表明，该汤剂能够显著降低脑梗死的体积，并抑制BBB破坏所引发的炎症因子释放。网络药理学分析亦揭示了HLJDT通过调节PI3K/AKT、MAPK等信号通路来干预缺血性损伤。尽管如此，HLJDT如何通过调控外周免疫与中枢神经系统之间的相互作用来抑制T细胞的浸润，这一机制尚需进一步深入研究。

日前，一篇名为“Huang-Lian-Jie-Du Decoction inhibits CD4+ T cell infiltration into CNS in MCAO rats by regulating BBB”的研究论文详细阐述了HLJD通过修复BBB的完整性、阻断T细胞的跨膜迁移以及平衡辅助T细胞亚群反应的治疗机制。

图1 论文首页

HLJDT可改善神经功能，减少梗死体积

模型建立后，大鼠出现了神经功能障碍，且通过感觉测试发现，触须反应不一致，爪压下疼痛反应减少，右侧畸形缩小、上睑下垂、睑裂狭窄和眼球内陷。治疗前，Garcia评分显示各组间无显著差异。与假手术组相比，模型组在治疗3天后的Garcia评分显著下降，表明再灌注后存在严重的神经功能障碍。治疗组与模型组相比，表现出不同程度的改善。FTY720组和HLJDT中、高剂量组的神经功能有显著改善，而HLJDT低剂量组无显著改善。与FTY720组相比，低剂量HLJDT在神经功能改善方面表现较差，中高剂量组与FTY720相比疗效无显著差异（图2A）。TTC染色显示正常组织呈现深红色，梗死组织呈现白色（图2B）。Image-J软件分析表明，与模型组相比，FTY720组和HLJDT低、中、高剂量组的梗死体积显著减少，中、高剂量组的效果更为显著。FTY720组与HLJDT在脑梗死改善方面无显著差异（图2C）。

图2 HLJDT可有效改善脑缺血-再灌注损伤

HLJDT可减少了病理损害

假手术组的梗死周围区域神经元数量众多，细胞核呈现清晰、较大且圆形的形态，核仁明显突出，染色质分布均匀。细胞质充满良好，染色均匀；皮质神经元排列整齐（图2D）。相比之下，缺血-再灌注损伤导致模型组神经元受损，其特征表现为神经元胞体肿胀，细胞核缩小、染色加深，形成核碎片。细胞质染色较浅，出现空泡化现象，血管周围水肿明显，细胞间隙扩大。与模型组相比，HLJDT低剂量组未显示出明显的病理改善。然而，FTY720和HLJDT中、高剂量组表现出较少的核固缩和碎片，改善了核的大小和形状，减少了细胞膜的破裂，降低了血管周围液体的积累，表明FTY720和HLJDT能够有效缓解由缺血再灌注引起的神经元损伤，并促进脑组织的恢复。

Nissl染色结果显示，假手术组的神经元清晰可见，尼氏体丰富，以颗粒或块状形式分布在细胞质中，染色均匀。神经元结构完整，形态正常，排列有序，核仁呈深蓝色。模型组神经元细胞体肿胀，细胞排列紊乱，间隙增大；尼氏小体减少；细胞核受损，位置发生移位，核仁缺失，染色质浓缩，固缩深染（图2E）。HLJDT低剂量组的病理表现未见明显改善，而FTY720和HLJDT中、高剂量组细胞体和细胞核形态有所改善，细胞肿胀和神经元凋亡减少，Nissl小体数量增加。表明FTY720和HLJDT能有效地减轻神经元损伤。

HLJDT调节外周性和中枢性炎症因子的平衡

HE染色结果表明，假手术组的脑组织中血管内皮细胞排列紧密，且血管周围炎症细胞较少。相对而言，模型组的脑血管周围存在广泛的炎症细胞浸润。与模型组相比，FTY720组和HLJDT组的血管周围炎症细胞数量显著减少，表明这两种治疗在一定程度上具备减轻缺血性中风后脑部炎症浸润的潜力（图3A）。

CD4+T淋巴细胞检测结果显示，在脑组织和外周血中，模型组的促炎因子显著增加，包括Th1细胞分泌的IFN-γ和Th17细胞分泌的IL-17A。治疗干预显著降低了这些促炎因子的水平。此外，FTY720和HLJDT给药后，MCAO大鼠的抗炎因子水平明显高于模型组。说明HLJDT通过降低促炎因子和增强抗炎因子，有效调节了CD4+T细胞的免疫炎症状态，从而实现了免疫炎症状态的平衡（图3B-I）。

图3 HLJDT调节MCAO大鼠的外周血和中枢外周血炎症平衡

HLJDT增加外周血T淋巴细胞计数

研究还发现，HLJDT治疗能够使外周血T细胞计数恢复至正常水平，表明其具有对外周血进行免疫调节的功能（图4A-C）。

图4 大鼠外周血和脑组织中CD3+和CD4+T细胞的表达

HLJDT抑制CD4+ T淋巴细胞浸润到中枢神经系统

此外，研究采用了免疫荧光染色技术，对大鼠脑组织中的CD3+T细胞和CD4+T细胞进行了标记。结果显示，模型组大鼠皮质梗死区域内的CD3+T细胞和CD4+T细胞数量有所上升。说明在脑梗死发生后的第三天，T细胞开始浸润受损的脑组织。经FTY720和HLJDT治疗后，梗死周边区域的CD3+T细胞和CD4+T细胞数量有所减少（图4D）；免疫荧光强度的统计分析结果与这些观察结果相吻合（图4E-F），说明HLJDT能够有效地减少外周T淋巴细胞向中枢神经系统的浸润。

研究还指出，在T细胞群体中，CD4+T细胞主要负责调节免疫反应，而CD8+T细胞则更倾向于直接消灭被感染或受损的细胞，CD4+T细胞通常占据总T细胞数量的30%至60%。

HLJDT可以改善血脑屏障的细胞旁紧密连接结构

透射电子显微镜图像显示，假手术组显示出接触点与融合的细胞膜紧密相连，形成一条连续且致密的结构线。与此形成鲜明对比的是，模型组显示出紧密连接的断裂与分离，导致内皮细胞间的缝隙变宽，这反映了紧密连接的完整性降低，并使得更多物质得以通过细胞旁途径进入脑组织。经FTY720和HLJDT处理后，被破坏或分离的紧密连接开始修复，细胞膜间的距离缩小，连接结构更为紧密，从而使得细胞间缝隙变窄（图5A）。

图5 HLJDT通过改善血脑屏障的细胞旁结构来抑制CD4+ T细胞的浸润

HLJDT可增强MCAO大鼠细胞旁紧密连接蛋白的表达

WB检测结果显示，模型组中，紧密连接蛋白咬合蛋白与粘附连接蛋白e-钙粘蛋白的表达水平显著下降。然而，FTY720与HLJDT处理均提升了细胞旁连接蛋白的表达量。说明HLJDT能够提升紧密连接蛋白的表达，进而促进血脑屏障旁细胞结构的修复（图5B-E）。

结论

综上所述，该研究首次以创新的方式证实了HLJDT能够通过双重机制发挥神经保护作用，并通过抗炎、修复血脑屏障和调节免疫平衡的多靶点效应，为大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠提供了全面的保护。

参考文献：

Congai Chen，Changxiang Li , Xin Lan, Zilin Ren, Yuxiao Zheng, Dan Chen, Wenxiu Xu, Youxiang Cui, Xueqian Wang, Fafeng Cheng, Qingguo Wang.Huang-Lian-Jie-Du Decoction inhibits CD4+ T cell infiltration into CNS in MCAO rats by regulating BBB.Phytomedicine.Volume 141, June 2025, 156607

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