淀粉样变性

淀粉样变性是由多种原因造成的淀粉样蛋白错误的折叠聚集，进而形成不溶性纤维在体内各器官组织细胞间的沉积，继而引起受累脏器功能逐渐衰竭的一种临床综合征。临床表现具有多样性，与累及的器官及其受累程度相关，常见受累器官有肾脏、心脏、肝脏、胃肠道、皮肤黏膜等，一般表现为受累器官肿大及功能障碍。

褐色斑点，逐渐增大，形成半球形圆锥形或者多角形丘疹，质地比较硬，表面多光滑发亮，可以有少量鳞屑、角化过度或者表面粗糙，伴有剧烈瘙痒感。

心室室壁厚度、房间隔厚度及心室僵硬度增加，进而导致心脏机械功能和传导系统功能改变，从而引发一系列症状，心律失常等，最后左心衰竭、猝死。

之所以称为淀粉样变性，是因其沉积物与淀粉都可遇碘变色，故称为淀粉样物，但其本质为蛋白质。目前发现的相关蛋白质有30多种，主要为AL蛋白和AA蛋白。根据淀粉样蛋白前体类型不同主要分为AL型和AA型淀粉样变性，另外还有一些其他少见类型（最常见的为AL型）。

不同的分型治疗方法不同，关键是抑制淀粉样物质的合成和沉积，减少淀粉样蛋白前体的产生。AA型淀粉样变性常继发于慢性感染，AL型淀粉样变性病因不明，为原发性系统性，常累及心脏和肾脏，预后较差。因此淀粉样变性的诊断及分型对临床极为重要。

 淀粉样变性的特殊染色

在组织病理染色中，淀粉样物常被伊红染成均匀一致的淡红色或淡粉色，与胶原纤维玻璃样变相似，不易鉴别，因此需要通过特殊染色来显示。刚果红染色是现在常用的方式，其染色方法有多种，其中甲醇刚果红染色的效果最好。

染色步骤如下：

试剂配置：

①甲醇刚果红染液：刚果红（congo red）0.5g，甲醇80ml，甘油20ml。

②分化液：氢氧化钾0.2g，80%酒精100ml。

③酸化高锰酸钾：5%高猛酸钾水溶液与0.3%硫酸水溶液，临用前等比例混合。

结果判读：

淀粉样物质光镜下为橘红色，偏振光纤维镜下呈苹果绿双折光。经酸化高锰酸钾处理后，再进行刚果红染色，AA蛋白失去对刚果红的亲和力，呈现阴性染色，而AL蛋白不受氧化处理影响，仍然呈现阳性染色。仍然阳性为AL型淀粉样变性，变为阴性为AA型淀粉样变性。

改进方案：

在实际染色过程中经常会遇到组织背景不干净，淀粉样变性区域着色过浅等问题。为解决上述问题，通过调整切片厚度及染色顺序，得到了较好的染色效果，现介绍如下：

一、考虑到先染刚果红再染苏木素，盐酸乙醇分化时往往造成刚果红脱色，致使刚果红染色不明显，我们调整染色顺序，先染苏木素，后染刚果红，得到了较好的染色效果，如图

图左：先刚果红后苏木素，刚果红未用氢氧化钾乙醇分化

图中：先刚果红后苏木素，刚果红氢氧化钾乙醇分化，效果比不分化要好

图右：先苏木素后刚果红，刚果红氢氧化钾乙醇分化，效果最好。

二、调整切片厚度

图左：3μm，染色浅淡，淀粉样物不明显。

图中：4μm，染色稍深。

图右：5μm，染色鲜艳，对比明显。

在不掉片的基础上，切片厚度可调整为6至7微米，阳性物质染色更强。染色过程中分化比较关键，分化时间较短胶原纤维也被染成红色；分化过度，淀粉样物质也被脱色，需要在显微镜下观察以控制分化程度。另有文献[1]提出适度缩短苏木素染色时间，可使淀粉样物质染色染色对比更明显。

刚果红属酸性染色剂，是一种钠盐，可溶于水和酒精，电离后分子的主要部分将离解为有色的阴离子和无色的钠离子（Na+）。带负电荷的刚果红有色阴离子，能与组织中带正电荷的成分结合，而产生非特异着色。为克服这一缺点，提高刚果红染液的p H值大于6很重要，它能增加刚果红与其他组织蛋白的电荷斥力（人体大部分蛋白的等电点小于6），减低非特异性着色[2]。

参考文献：

[1]何娇，朱小兰，姚军，等.切片厚度和衬染时间对甲醇刚果红染色的影响[J].诊断病理学杂志，2023，30（01）:97-98.

[2]刘介眉，严庆汉，路英杰，等.病理组织染色的理论方法和应用.北京:人民卫生出版社，1983.145-155.

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