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在流式实验中,除了配色和对比之外,我们还会经常碰到另一个棘手问题,那就是Fc效应 ——很多细胞外面表达的Fc受体,可以或许辨认并结合抗体的Fc端,导致抗体被标记到非目标细胞上,造成了成果的不精确和不真实。
以兔抗为例,兔IgG作为我们最常用的抗体类型之一,其Fc段与人IgG1的Fc段氨基酸序列同源性很高,尤其FcγR结合区域:
图1 兔IgG与人IgG1 Fc段氨基酸序列比对
兔IgG很轻易与人FcγR产生结合,我们经由过程亲和力测定实验(BLI法)发明,野生型兔IgG(Rabbit IgG-WT)与人Fc受体所有亚型均有强结合,二者间的亲和力根本和人IgG与人Fc受体一致:
图2 野生型兔IgG与人FcγR亲和力测定
图3 Fc受体封闭试剂后果测试
找到一个从根源上解决Fc效应的好办法?
FcZero-rAb™新型骨架流式抗体正式上线!
针对以上研究痛点和难点,Proteintech的研发团队基于ABCE™单个B细胞抗体 发明平台 和FcZero™沉默技巧平台 开辟了一系列的FcZero-rAb™新型骨架流式抗体 ,该系列立异产品采取了全新的抗体骨架,从根源上清除了由Fc受体结合引起的非特异性背景旌旗灯号。
图4 FcZero-rAb™抗体的Fc沉默道理
相较于传统骨架流式抗体的先天不足,FcZero-rAb™新型骨架流式抗体冲破了行业壁垒,具有FcZero™沉默技巧平台带来的多重技巧改革优势:① 完全清除Fc效应,②定点定量标记,③仅需一种同型对比,④高稳定性。
1. FcZero-rAb™抗体完全清除Fc效应
FcZero-rAb™新型骨架流式抗体的核心在于FcZero™沉默技巧 ,Proteintech经由过程该技巧在Rabbit IgG的Fc CH2区域进行关键氨基酸位点突变,樊篱了抗体与Fc受体的结合,形成Fc silencing(Fc效应沉默)。
该技巧完全清除了兔IgG的Fc段与人Fc受体的结合 ,包含FcγRI (CD64)、FcγRII (CD32) 和FcγRIII (CD16)等多种Fc受体。
图5 FcZero-rAb™IgG与人FcγR亲和力测定
经由过程FcZero-rAb™新型骨架流式抗体分析人PBMCs样本,我们可以看到,与传统流式抗体或者传统流式抗体+Fc受体封闭剂比拟,FcZero-rAb™新型流式抗体背景更干净,分群更清楚。
图6 FcZero-rAb™抗体Fc沉默后果比较
2. FcZero-rAb™抗体定点定量标记
FcZero-rAb™新型骨架流式抗体采取了生物定点标记技巧,每一个裸抗分子的Fc段都有两个明白标记位点,可以定点定量标记所需偶联物。
与市情上常用的化学随机标记比拟,生物定点标记技巧不仅可以或许包管偶联物远离抗体活性中间 ,仅在Fc末尾而不影响抗体的抗原辨认与结合才能,同时还能确保旌旗灯号强度的均一性和批次间标记情况的反复性 。
图7 生物定点标记和化学随机标记后果比较
3. FcZero-rAb™抗体仅需一种同型对比
传统流式抗体即使来源于同一个物种,也可能有多个抗体亚型,比如小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgGM(下图右);而FcZero-rAb™新型骨架流式抗体全系列采取了同一种新型抗体骨架,仅需一种同型对比即可,不仅可以或许降低实验难度,还能有效节俭成本。
在此小P向各位师长教师发出真诚邀请,迎接体验我们立异技巧带来的新一代重组流式抗体!添加微旌旗灯号:JX1358874227 或者存眷ProteintechGroup官方"大众,"号,即可申领试用装和新品优惠 。
图8 FcZero-rAb™抗体仅需一种同型对比
4. FcZero-rAb™抗体可经久稳定保存
针对FcZero-rAb™新型骨架流式抗体的全新骨架,经SEC-HPLC纯度分析、亲和力测定和流式实验检测,FcZero-rAb™新型骨架流式抗体在4℃保存1年之后,成分依旧单一稳定,具有高生物活性。
图9 FcZero-rAb™抗体热加快实验SEC-HPLC纯度分析
图10 FcZero-rAb™抗体热加快实验亲和力检测
图11 FcZero-rAb™抗体热加快实验流式检测
Uni-rAb™重组流式抗体同步上线!
FcZero-rAb™新型骨架流式抗体作为革命性的新型流式抗体,一方面是基于FcZero™沉默技巧平台 ,另一方面则是依托ABCE™单个B细胞抗体发明平台 。
ABCE™单个B细胞抗体发明平台是Proteintech最新一代重组兔单克隆抗体开辟平台,该平台所开辟的Uni-rAb™重组兔单克隆抗体已于 2024年6月上线,其“高质价比”快速博得了大年夜家的承认和爱好。
如今,与FcZero-rAb™新型骨架流式抗体同步,Uni-rAb™传统骨架重组流式抗体也正式表态,它采取的是野生型Rabbit IgG抗体骨架,二者间除抗体骨架存在差别之外,其他性质保持一致,均持续了Uni-rAb™重组兔单克隆抗体高特异性 、高亲和力 及高批次间一致性 的优良传统。经充分测试,Uni-rAb™传统骨架重组流式抗体与经典克隆比拟具有类似或更优胜的机能。
图12 Uni-rAb™抗体(左)与其他品牌抗体比较(右)
Uni-rAb™传统骨架重组流式抗体可以或许兼容其他传统流式抗体体系,可作为流式实验的惯例选择 ;FcZero-rAb™新型骨架流式抗体可以或许供给更 高质量的支撑 ,可完美樊篱Fc效应干扰,拿到更真实更靠得住的实验成果。二者可知足不合的实验场景需求。
作为专业抗体临盆商,Proteintech在立异的门路上从未止步。
从兔多抗、鼠单抗、羊驼纳米抗体、重组兔单抗,到如今的FcZero-rAb™新型骨架流式抗体 和Uni-rAb™传统骨架重组流式抗体 ,Proteintech持续立异,力争经由过程最先辈的技巧和工艺,给大年夜家供给最优质的产品与办事,同时保持合理且更低的价格;让所有的科研工作者,都能享受到技巧立异给大年夜家带来的便利和助力。
这一次,基于最新平台和最新技巧锻造的FcZero-rAb™新型骨架流式抗体 和Uni-rAb™传统骨架重组流式抗体 ,欲望能给大年夜家带来全新的体验!
PS:除了产品研发技巧的立异之外,Proteintech官网近期也将上线一个行业前所未有的立异功能,将经由过程3D构造展示每一个抗体与抗原的结合位点,并可根据所限制的序列区域选择最适配的抗体,敬请等待!
FcZero-rAb™新型骨架流式抗体列表
是以我们在实验时,平日须要额外增长一个步调:应用Fc受体封闭试剂 来清除Fc效应(Fc block) 。这一操作不仅增长了实验难度和成本,并且Fc受体封闭试剂的封闭后果也是参差不齐;比如我们比来采购的一个Fc受体封闭试剂,有必定封闭后果,但后果不尽如人意:
截止今日,Proteintech已经上线百余个FcZero-rAb™新型骨架流式抗体和千余个Uni-rAb™传统骨架重组流式抗体,前者今朝可供给PE和APC两种标记,后者可供给9种配色,并且在ABCE™单个B细胞抗体发明平台的高通量加持下,每月都能上新大年夜量新产品!
FcZero-rAb™新型骨架流式抗体列表
(新产品及新配色持续更新中)
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