在过去的十几年中，T细胞免疫检查点（ICP）的发现以及CTLA-4和PD-1/PD-L1单克隆抗体抑制剂的开发彻底改变了免疫肿瘤学领域。然而，由于肿瘤抵抗、缺乏肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）和抑制性髓系细胞的存在，仅有10-30%的患者表现出长期，持久的反应，这些广泛使用的ICI的响应频率并不理想。此外，免疫相关不良事件（IRAE）的发生和获得性耐药也是巨大的障碍。因此，寻找新的与肿瘤微环境相关的其他免疫检查点称为解决这些问题的方向之一。

目前，负调节抗肿瘤免疫反应的抑制性ICP的列表正在增加。在这些新一代ICP中，淋巴细胞激活基因-3（LAG-3）已成为癌症治疗中最有前景和潜力的靶点之一。在目前进行的临床评估中，针对LAG-3的阻断性单抗和双抗多达22种。根据目前已有的临床结果，可以肯定的是，LAG-3与PD-1在促进癌细胞免疫逃逸方面表现出显著的协同作用。由于LAG3与PD-1在机制上的互补性，LAG3联合PD-1已成为重要的肿瘤免疫治疗策略。

肿瘤免疫治疗靶点图

LAG-3的分子特性

LAG-3是一种Ⅰ型跨膜蛋白，具有四个Ig样结构域（D1-D4）。LAG-3的D1由9条β-链组成，它们被称为A、B、C、C'、C”、D、E、F和G链。大约30个氨基酸的附加序列位于C和C'链之间，形成一个环，称为“额外环”。尽管序列相似性较低，但在人和小鼠LAG-3中都可以观察到这个环，据报道此环参与了LAG-3和主要组织相容性复合体II类（MHCII）之间的关联。此外，LAG-3高度糖基化，在D2-D4中存在多个N-糖基化位点。Galectin-3和肝窦内皮细胞凝集素（LSECtin）被认为与LAG-3聚糖存在相互作用。

LAG-3的D4和跨膜区之间的存在一个较长的氨基酸序列称为“连接肽”。基于小鼠模型，发现金属蛋白酶ADAM10和ADAM17可以在CP处裂解LAG-3，并以可溶性形式释放LAG-3胞外区域。因此，ADAM10和ADAM17可能通过调节细胞表面LAG-3的数量来调节LAG-3的抑制作用。人与小鼠CP的氨基酸序列同源性较低，因此人类LAG-3是否也能被这些金属蛋白酶裂解，还有待进一步研究。

LAG-3的胞内区由大约60个氨基酸残基组成，缺乏典型的抑制基序，如免疫受体基于酪氨酸的抑制基序。然而，它包含几个氨基酸序列，这些氨基酸序列在不同的LAG-3物种中非常保守，而不与其他抑制性共受体共享。这些序列包括并列膜区的FSAL，中部区域的KIEELE，10-15个谷氨酸串联重复序列，以及在C末端区域的倾向但不限于的脯氨酸（EX-repeat）。LAG-3抑制T细胞活化需要细胞内区域的信号传递，它可以通过这些序列传递不同的抑制信号。

LAG-3的表达和配体

与PD-1和CTLA-4一样，LAG-3在原始T细胞上不表达，但在抗原刺激下可在CD4+和CD8+T细胞上诱导表达。LAG-3在具有抑制功能的CD4+T细胞亚群中也有表达。Foxp3+调节性T（Treg）细胞结构性地表达LAG-3。

LAG-3在CD3+CD4-CD8-T细胞、TCRαβCD8αα上皮内淋巴细胞、γδT细胞和NKT细胞上也有表达，据报道，其在活化NK细胞上的表达参与了对小鼠MHCI阴性靶细胞的杀伤作用。浆细胞样树突状细胞和活化B细胞也在其细胞表面表达LAG-3。然而，LAG-3在这些细胞中的功能作用仍然知之甚少。此外，据报道LAG-3在神经元上也有表达，并作为α-突触核蛋白纤维的受体。

LAG-3区分pMHCII的构象并选择性地与稳定的pMHCII结合。除了稳定的pMHCII外，还有其他几种分子被报道为LAG-3的可能配体。galectin-3和LSECtin已被证明与LAG-3上的聚糖相互作用。Galectin-3属于Galectin家族，是一种由多种肿瘤细胞和肿瘤间质细胞分泌的可溶性半乳糖结合凝集素。LSECtin是C型凝集素家族的一员，主要在肝脏中表达。

除了免疫抑制作用外，LAG-3似乎在神经系统中也有明显的作用。Mao等人报道LAG-3可以与α-突触核蛋白纤维结合，这与帕金森病的发病机制有关。α-突触核蛋白纤维与LAG-3的结合触发了α-突触核蛋白纤维的内吞作用、细胞间传递和神经毒性。

LAG-3免疫抑制作用

一直以来，肿瘤中LAG-3表达水平和LAG-3+细胞浸润与肿瘤进展、预后不良和各种类型的人类肿瘤相关。这些结果强烈表明，LAG-3参与了类似PD-1的肿瘤免疫逃逸机制。

然而，LAG-3的确切信号通路仍然未知。已经证明，LAG-3的抑制作用并不是由与CD4的竞争性结合pMHC II引起的。有研究报告称，LAG-3可能是通过存在于膜近端区域的FXXL基序与C-末端的EX-repeat协同诱导抑制机制。在敲除EX重复序列或在FXXL序列中诱导突变时，LAG-3的抑制作用消失。LAG-3是如何与细胞内信号蛋白的作用机制，仍然有许多未知。

研究表明，LAG-3可以在活化的CD8+T细胞上传递抑制信号。此外，TME中的Treg通过下调炎性细胞因子和上调抑制活性来削弱肿瘤特异性免疫反应，而LAG-3已被证明在支持Treg活动方面至关重要。对非小细胞肺癌（NSCLC）患者的研究显示，与外周血和正常组织中的Treg相比，肿瘤中的Treg表达LAG-3升高。

另外，树突状细胞表面LAG-3的表达可增加免疫抑制性细胞因子的分泌，如IL-10和TGF-β。这些细胞因子对CD8+T细胞、NK细胞和DC的活性产生抑制作用。此外，Treg通过LAG-3–pMHC II相互作用直接抑制pDC。这些都会启动抑制途径，阻碍DC的增殖和成熟。

LAG-3在活化的NK细胞上表达的直接作用尚不完全清楚。然而，在同时表达NK受体和T细胞受体的NKT细胞上，LAG-3已显示出下调其增殖的作用。B细胞上LAG-3的表达已被证明是T细胞依赖性的，通过产生IL-10发挥免疫抑制活性。此外， LAG-3在TAMs中也有表达，尽管作用尚不完全清楚，但可以推测TAM上的LAG-3表达有助于其肿瘤促进功能。

LAG-3的临床开发

基于临床前的观察，尤其是与针对PD-1的药物联合使用带来的益处。到目前为止，已经开发出至少20种针对LAG-3的药物。包括抗LAG-3阻断性抗体（relatlimab（BMS-986016）、Sym022、TSR-033、REGN3767、LAG525、INCAGN2385-101、MK-4280和BI754111）以及拮抗双特异性抗体（MGD013（抗PD-1/LAG-3）、FS118（Anti-LAG-3/PD-L1）和XmAb22841 (anti-CTLA-4/LAG-3))等。

其他LAG-3靶向药物也被用于癌症治疗。IMP321是一种可溶性重组融合蛋白，由LAG-3的胞外区和IgG的Fc区组成，通过MHCII介导反向信号激活抗原提呈细胞，导致IL-12和TNF的增加，CD80和CD86的上调。在目前进行的临床试验中，IMP321单药治疗或与其他疗法联合治疗的疗效一般。通过MHCII反向信号的细节仍然未知，需要仔细研究。

抗-LAG-3消耗抗体（GSK2831781）和激动剂抗体（IMP761）作为治疗自身免疫性疾病的潜在治疗剂也有报道。尽管这些抗体旨在清除或抑制致病性T细胞，但它们也可能消耗或抑制Treg细胞。进一步的研究阐明这种抗体的功能以及LAG-3的生物学特性有望促进其发展。

LAG-3单抗

全球关于LAG-3单抗的研究约有30余项，进入临床的有16项。其中进展最快的是百时美施贵宝研发（BMS）的Relatlimab。

2021年9月20日，百时美施贵宝递交了Relatlimab上市申请。适应症为用于和PD-1抗体Nivolumab联合治疗转移性不可切除的黑色素瘤。目前，Relatlimab还在胃癌、肝癌等癌种中进行临床研究。

在今年的ASCO大会上，BMS公布了其LAG-3抗体Relatlimab与PD-1抗体纳武单抗联合用于治疗晚期黑色素瘤的试验结果，显示将714名晚期黑色素瘤患者被随机分配接受Relatlimab+纳武单抗联合治疗或纳武单抗单药治疗，其中355名接受Relatlimab+纳武单抗治疗的患者，中位无进展生存期10.1个月，1年无进展生存率47.7%；359名接受纳武单抗单药治疗的患者，中位无进展生存期4.6个月，1年无进展生存率36.0%；Relatlimab的加入让晚期黑色素瘤患者疾病进展的风险降低了25%。

 

图片来源：BMS官网

紧随其后的是默沙东的MK-4280A。MK-4280A是一种由LAG-3抗体Favezelimab（MK-4280）和PD-1抑制剂Keytruda的联合治疗方案，其中Favezelimab能够阻断MHCII类受体与LAG-3之间的相互作用，抑制LAG-3上调，进而恢复T细胞对肿瘤细胞的杀伤效应。2021年ASCO年会期间，默沙东首次公布了Favezelimab联合Keytruda治疗微卫星稳定性（MSS）结直肠癌（CRC）患者的I期临床试验数据。研究结果显示，在客观缓解率(ORR)方面，PD-L1综合阳性评分（CPS）≥1组（n=36）为11%，PD-L1CPS <1组（n=35）为2.9%；在疾病控制率（DCR）方面，PD-L1CPS ≥1组为36.1%，PD-L1CPS <1组为14.3%；两组的中位缓解持续时间（DOR）均为10.6个月。

图片来源：默沙东官网

除BMS和默沙东外，各大制药巨头包括GlaxoSmithKline、BoehringerIngelheim、诺华等也有布局。

诺华的LAG525一种人源化抗LAG-3的IgG4单克隆抗体，其Ⅰ/Ⅱ期试验将LAG525作为单一疗法或与新型抗PD-1抑 制剂（PDR001）联用，旨在对患有晚期/转移性实体瘤（如非小细胞肺癌、黑素瘤）的患者进行LAG525的剂量毒性研究，以确定最大耐受剂量，评估其安全性。Ⅱ期试验将涉及LAG525或LAG525/PDR001联合使用的剂量评估。

BI-754111则是由BoehringerIngelheim开发的一种LAG-3的单克隆抗体，在剂量递增阶段的I期临床研究中，联合BI-754091（抗PD-1）治疗难治性实体瘤，主要终点分别为剂量限制性毒性（DLT）、最大耐受剂量（MTD）和ORR。后期的生物标志物分析显示，对治疗产生部分响应（PR）或稳定疾病（SD）的患者IFN-γ基因特征分数增高。此外，在治疗前活检标本中，PD-L1基因表达高的患者的治疗效果较好。

图片来源：InOncology

INCYTE和Agenus合作开发的INCAGN2385目前单药的临床应该完成,已经启动PD-1+Lag3+Tim3三联的临床。

国内方面，目前进展最快的是维立志博的LBL-007。就在前不久，维立志博宣布与百济神州达成抗LAG-3抗体LBL-007的全球授权和合作协议，百济神州将获得中国境外的独家商业化授权。

LBL-007是一种通过筛选人类抗体噬菌体展示库开发的一种新型在研抗LAG-3抗体，已证明能够与人类LAG-3特异性结合，刺激IL-2释放，阻断LAG-3与MHCII和其他已知配体的结合。LBL-007单药在临床前研究显著抑制肿瘤生长，与抗PD-1抗体联用时肿瘤抑制效果更显著。LBL-007已获得美国和中国的临床试验许可，在中国已经完成1a期临床试验，正在进行1b/2期临床试验。

LAG-3双抗

再鼎医药与MacroGenics合作开发的Tebotelimab(MGD013) 是一款同类首创PD-1/LAG-3DART分子双特异性抗体。目前，MacroGenics正在开展依布妥组单抗联合retifanlimab或tebotelimab用于头颈部鳞状细胞癌（SCCHN）一线治疗的Ⅱ期临床研究；2021年6月和7月，再鼎医药完成了胆管癌和三阴性乳腺癌的两组队列的首批患者入组；此外，在胃癌免疫治疗领域，正在使用tebotelimab与PARP抑制剂尼拉帕利联合探索在胃癌中的应用。

图片来源：MacroGenics

罗氏研发的RO7247669是一款靶向PD-1和LAG-3的双特异抗体，其与PD-1有较高的亲合力，而与LAG-3的亲合力较低，同时通过PGLALA突变去除抗体的Fc相关效应。目前，该药物正在全国范围内展开1/2期临床试验。

F-star与德国默克合作开发的FS118是一种四价双特异性抗体，分别靶向LAG-3和PD-L两个免疫检查点，旨在治疗对PD-1疗法产生抗性的肿瘤。其主要技术是对抗体的Fc进行改造，使其能够结合新的抗原。然后根据需要在Fab引入另外一个靶点，因此形成和2+2型的双特异抗体。通过临床前研究的模型分析，F-star证明与单一药物治疗方案相比，FS118可以提高功效。目前处于一期临床阶段。

来源于网络

同时还有Xencor开发的XmAb22841靶向LAG-3和CTLA-4，目前处于一期临床阶段。

EMB-02是由岸迈生物自主开发的一款同时靶向免疫检查点蛋白PD-1和LAG-3的双特异性抗体，旨在同时或独立靶向人类PD-1和LAG-3，并破坏这两种途径介导的免疫抑制，从而恢复T细胞效应功能并增强抗癌活性。目前，在中国的IND申报已获CDE批准。正在进行的一项全球I/II期研究显示：EMB-02已表现出显著的抗肿瘤活性；在给药治疗后，EMB-02给药组有一半的肿瘤出现完全消退。

来源于网路

信达生物也在研发的IBI-323是一款靶向LAG-3和PD-L1的双特异性抗体。IBI-323是一款2+2对称型的双特异抗体，在抗体的Fc端融合了可以识别第二个抗原的纳米抗体（VHH）。据报道，在临床前研究中，IBI323已显示出体外疗效及体内疗效均优于抗LAG-3单抗与抗PD-L1单抗的联合疗法。去年10月，IBI323已拿到了NMPA的临床批件，用于治疗晚期恶性肿瘤。

在临床前研究中，IBI-323已显示出体外疗效及体内疗效，比抗PD-L1单抗和抗LAG-3单抗的组合更有效和持久地激活T淋巴细胞激活。2021年7月，一项开放标签、多中心的I期剂量递增和扩展研究在中国开展，旨在评估IBI323 在标准护理治疗中癌症进展的晚期恶性肿瘤患者中的安全性、耐受性、潜在最佳剂量和初步疗效。

此外，国内布局LAG-3双抗的还有天境生物（LAG3；PD-L1）、康方生物（LAG3；PD-1）、方坦思（LAG3；PD-1）等。

融合蛋白

Immutep研发的IMP321（eftilagimodalpha）正在AIPAC（主动免疫疗法PAClitaxel）临床试验中进行测试，这是一项转移性乳腺癌II期研究中的化学免疫疗法组合。在另一项临床研究TACTI-mel（黑色素瘤中的两种ACTive免疫疗法）中，评估了IMP321与免疫检查点抑制剂联合治疗转移性黑色素瘤的效果。

据此前公布的II期临床试验TACTI-002中期数据是基于eftilagimodalpha联合帕博利珠单抗一线治疗非小细胞肺癌（NSCLC）。该研究结果显示，联合治疗总缓解率（ORR）达到47%，而帕博利珠单抗单药治疗一般仅为20%左右。对比单独使用帕博利珠单抗，LAG-3蛋白能够激活抗原呈递细胞（APC）使T细胞聚集，从而可能产生更强的抗肿瘤效应。

小结

靶向抑制性协同受体PD-1和CTLA-4的检查点免疫疗法彻底改变了癌症治疗，而LAG-3作为新一代发现的抑制性检查点，有望成为肿瘤治疗中极具前景的靶点。然而，我们对LAG-3的理解仍然非常有限，许多基本问题仍然没有得到解答。LAG-3的信号转导机制尚不清楚，其配体也很复杂。LAG-3在多种细胞中表达，然而，LAG-3的功能以及LAG-3阻断剂在每种类型细胞中的作用尚未阐明。我们还需要研究LAG-3和其他共受体的功能差异、冗余和协同作用。通过更详细地阐明LAG-3的功能特性，我们才可以合理地设计LAG-3靶向治疗各种疾病，如癌症和自身免疫疾病。

参考文献：

1. LAG-3: from molecular functions to clinical applications. J Immunother Cancer. 2020 Sep;8(2):e001014.

2. The Next-Generation Immune Checkpoint LAG-3 and Its Therapeutic Potentialin Oncology: Third Time’s a Charm. Int J Mol Sci. 2021 Jan; 22(1): 75.

内容来自于：小药说药，求实药社  

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