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由于其高特异性和敏感性,Luminex单抗原珠(SAB)检测是确定HLA抗体特异性的绝佳工具。目前,SAB检测由两家供应商商业化,One Lambda(OL)和Lifecodes-Immucor(LC)。两家供应商都提供平均荧光强度(MFI)值作为抗体与SAB结合的读数。
尽管是半定量读数,但MFI值经常被用作临床决策的截止值。然而,两家供应商之间的制造工艺(例如,抗原密度和涂在珠上的完整性)和SAB测定的测试方案的差异可能导致MFI值的差异。因此,使用随意选择的MFI值作为截止值,对I类和II类使用单一截止值,或者根据仅与一家供应商合作的经验使用通用截止值,可能会导致对SAB结果的误解。
到目前为止,两家供应商的SAB结果已经在一些研究中进行了比较,其中要么探讨了导致两家供应商之间最佳协议的MFI范围,要么使用两个供应商的单一截止值来分配阳性结果。
Reed等人提出,两个供应商之间最佳协议的最佳MFI截止值在1000到1500 MFI之间。Clerkin等人表明,当阳性抗体分配的MFI截止值为4000而不是1000时,两个供应商之间的协议增加了。除此之外,研究者们在这些研究中使用线性回归模型来评估两个供应商之间MFI值的相关性。
值得注意的是,目前还没有研究提供一种策略来模拟两个供应商的MFI值之间的关系,从而使MFI从一个供应商转换到另一个供应商。许多中心同时使用两个供应商的套件或从一个切换到另一个,这就需要协调两个供应商的MFI值。
2023年5月2日发表在HLA上的文章,研究者们的目标是生成一种方法,用于在HLA抗体结果的大数据集中协调两个Luminex SAB供应商的MFI值之间的截止值。为此,研究者们首先开发了一个非线性双曲线模型,以更好地理解来自两个不同供应商的MFI值在给定数据集中的相互关系,然后使用该模型建立数据驱动的、可比较的、特定于供应商的截止点,完全独立于用户使用一个或另一个供应商的体验。
非线性模型最优拟合数据:(A)背景校正/基线MFI上常见HLA I类珠的线性和非线性回归模型(B) raw MFI
线性模型用红色表示,非线性双曲线模型用绿色表示
使用OL和LC SAB试剂盒对47例经edta处理的血清HLA抗体数据进行分析。MFI比较常见HLAⅰ类珠84例和ⅱ类珠63例。在探索集(n = 24)中,通过基因座特异性最高自MFI减法校正的原始MFI非线性双曲线模型产生了最高的相关性(I类 r2=0.946, II类 r2= 0.898)。
在独立验证集(n = 12)中验证模型的性能(I类 r2=0.952, II类 r2=0.911)。此外,在移植后血清样本的独立队列(n = 11)中,使用当前模型规定的供应商特异性MFI截止值,我们发现两家供应商在头部特异性反应性分配方面的准确率为94%。
通过实验结果,研究者们建议使用非线性双曲线建模方法与自我HLA校正和位点特异性分析来协调特定研究数据集中两个供应商之间的MFI值,并且由于两种检测方法之间存在相当大的差异,不建议对单个患者样本使用MFI转换。
根据文献检索发现,本文是首篇提供非线性建模方法的研究,能够在两个供应商之间转换MFI值,并建立用户独立、特定于数据集的MFI截止。目前的模型将有助于为两个不同的工具包建立可比的MFI截止值,至少在研究大型数据集的人口层面上。但是,研究者们强烈建议对单个患者样本进行抗体模式分析,以获得准确的HLA抗体分配,但应该记住,根据特异性,两种检测的变化排除了单个患者从一个供应商到另一个供应商的MFI转换。
原始出处
A modeling approach for mean fluorescence intensity value harmonization and cutoff prediction for luminex single antigen bead assays of two different vendors. HLA. 2023; 1- 13. doi:10.1111/tan.15082 , , , , , .
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