肾纤维化是各种慢性肾脏疾病（CKD）进展的共同终末病理过程，严重威胁患者健康。传统中医药因其复方多组分、协同作用优势，在临床防治CKD中应用广泛，但因成分复杂，活性物质基础难以明确，阻碍了其现代化研究和精准应用。胡椒长藤，别名毕部，为多年生藤本植物，在多种中医处方中用于改善肾功能和抗纤维化，但其具体活性成分及作用机制尚未系统阐明。

本研究首次建立了一种基于空心纤维细胞捕获技术结合高效液相色谱（HFCF-HPLC）的新型筛选平台，针对传统中药胡椒长藤（Piper longum L）中的抗肾纤维化活性成分进行高效筛选。通过诱导人肾近曲小管上皮细胞HK-2纤维化模型，结合网络药理学和分子生物学验证，发现荜茇酰胺（Piperlongumine, PIPA）和荜茇明宁碱（Piperlonguminine, PLG）为其中的关键活性成分。体内单侧肾缺血再灌注损伤（uIRI）模型进一步证实PIPA显著减轻肾纤维化，改善肾功能，提示其潜在临床应用价值。

图：研究流程图

研究人员利用转化生长因子-β（TGF-β）诱导HK-2细胞形成纤维化模型，作为活性筛选细胞。构建空心纤维细胞捕获系统，通过细胞包被的空心纤维吸附并捕获胡椒长藤提取物中的活性成分，结合高效液相色谱（HPLC）分析筛选活性分子。网络药理学辅助预测潜在活性成分及作用靶点，联合Western blot、免疫组化验证抗纤维化效果。体内采用C57BL/6J小鼠单侧肾缺血再灌注伴延迟对侧肾切除模型（uIRI）评估PIPA的药效，通过血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、组织学染色及蛋白表达分析肾纤维化程度。

主要结果

1. 空心纤维细胞捕获结合HPLC（HFCF-HPLC）成功筛选出胡椒长藤中的主要活性成分：PIPA、PLG和胡椒碱（PIPE），其中PIPA和PLG具有较高的细胞结合率（细胞捕获因子CFF>2），而PIPA表现出最强的体外抗纤维化活性。

图：中空纤维内表面接种细胞的形态和增殖活性

2. 细胞实验显示，PIPA显著抑制TGF-β诱导的HK-2细胞中纤维化标志物α-SMA和胶原蛋白I的表达，优于PLG和PIPE。细胞活力检测显示，浓度100 mg/mL的胡椒长藤提取物兼顾筛选效果及细胞存活率。

图：模型细胞捕获的卡马西平的色谱图

3. 体内uIRI模型中，PIPA较大剂量（≥10 mg/kg）显著降低血清肌酐和尿素氮，改善肾组织病理损伤，减少肾间质纤维化及胶原沉积。免疫组化和Western blot验证，PIPA降低了肾组织α-SMA和胶原蛋白I的表达，显示良好的肾保护作用。

图：基于中空纤维细胞捕获 - 高效液相色谱法（HFCF-HPLC）与体外实验的靶点鉴定

4. 网络药理学辅助发现胡椒长藤活性成分可能通过调控TGF-β信号通路、上皮间质转化（EMT）等多条途径发挥抗纤维化作用，PIPA已被证明能调节E-钙粘蛋白及转录因子Snail1、Twist1，抑制EMT进程。

研究结论

本研究创新性构建了基于纤维化人肾近曲小管细胞的空心纤维细胞捕获-高效液相色谱筛选体系，实现了胡椒长藤抗肾纤维化活性成分的快速精准筛选。PIPA作为主要抗纤维化成分，体内外均表现出显著的肾保护效果。该方法为传统中药活性成分筛选提供了新思路和技术平台，有助于推进中药现代化及抗肾纤维化新药研发。

原始出处

Tian J, Zhou N, Wang H, Jing W, Zheng G. Identification of anti-fibrotic compounds from Piper longum L via hollow fiber cell fishing and high-performance liquid chromatography with in vivo and in vitro validation. Chin Med. 2025;20(1):127. Published 2025 Aug 19. doi:10.1186/s13020-025-01177-z

Tags： Chin Med：首次构建纤维化细胞 HFCF-HPLC 体系！从胡椒长藤中高效筛选出抗肾纤维化核心成分荜茇酰胺