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背景:中医在中国有几千年的历史。痛风清消方(TFQXF)经煎煮和口服治疗痛风性关节炎(GA)有显著疗效。中医通常被认为是一种经验医学,缺乏现代科学研究,TFQXF的疗效也面临同样的问题。因此,该研究旨在从动物实验、细胞实验、高通量基因测序等方面阐明TFQXF的作用机制。
目的:基于中性粒细胞胞外诱捕网研究TFQXF对痛风性关节炎的改善作用。
方法:单尿酸钠(Monosodium Urate, MSU)干预SD雄性大鼠,以TFQXF给药建立GA模型。21天后:PicoGreen分光光度法检测DNA /中性粒细胞胞外诱捕网(NETs),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测髓过氧化物酶(MPO)和中性粒细胞弹性酶(NE);踝关节滑膜组织:免疫组化检测MPO和NE;逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测MPO、NE、cxcl9和CXCL10基因及蛋白表达水平。
细胞实验:用MSU模型和不同浓度的含TFQXF的血清处理SD雄性大鼠的原代中性粒细胞,观察细胞存活率、活性氧(ROS)水平和凋亡情况;收集细胞培养上清,PicoGreen荧光分光光度法测定DNA / NETs,免疫荧光法测定白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)、MPO和NETs的表达水平。高通量测序和生物信息学筛选关键靶基因,并使用Western blot和RT-qPCR进行验证。
结果:注射TFQXF后,GA大鼠ds DNA / NETs、MPO和NE的表达水平以及滑膜组织MPO、NE、CXCL 9和CXCL10的表达水平均降低。MSU干预促进ROS生成,抑制中性粒细胞凋亡,提高ds DNA / NETs、IL-6、TNF-α表达水平,降低TGF-β1表达,降低MPO和NE的荧光。经含TFQXF血清和双氯芬酸钠干预后,TGF-β1水平升高,其余指标下降。关键基因COL1A1、COL3A1和MMP 2的验证表明,在MSU干预下,其水平升高,而在TFQXF含血清和双氯芬酸钠干预下,其水平下降。
结论:TFQXF可能抑制中性粒细胞募集和NETs释放,减轻炎症,促进GA炎症恢复健康。在应对GA的全球挑战时,中医提供了有价值的参考和观点。
原始出处:
Li H, Yuan Q, Sun W, et al. Investigating the mechanism of Tongfeng Qingxiao Formula for improving gouty arthritis based on the neutrophil extracellular trapping network. J Ethnopharmacol. Published online December 28, 2024. doi:10.1016/j.jep.2024.119304
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