腰椎间盘突出症（LDH）是临床较为常见的退行性疾病，是引起腰椎和腿部疼痛症状的关键因素。它主要影响20-50岁的人，并有向年轻年龄组增加的趋势。LDH诱发症状的各种机制已被广泛研究，有证据表明，即使在没有机械压迫的情况下，髓核组织也可以引起背根神经节（DRG）的兴奋性变化。研究人员利用神经生理学技术在啮齿动物模型中研究DRG在LDH相关的根性疼痛中的作用。他们报告说，与神经根脂肪处理的对照组相比，在非压缩条件下将髓核组织应用于神经根会导致DRG的兴奋性和机械超敏性增加。此外，观察到它增加神经内液压力，减少DRG血流量，并引发兴奋性，这与随后的免疫和炎症反应密切相关。

在猪自体髓核暴露于脊神经根的模型中，发现T淋巴细胞在暴露于全身免疫系统三周后被刺激产生CD4+Th2细胞，产生IL-4，通过IL和TNF-α释放促进椎间盘内的自身免疫反应，导致疼痛发生。在大鼠中，在神经根附近不压迫的自体髓核植入导致炎症因子IL-17和IL-23水平升高，疼痛阈值降低，提示椎间盘外的髓核升高炎症因子，损害周围神经根，导致疼痛。目前，非压缩性腰椎间盘突出症（NCLDH）的临床干预措施主要集中在减轻疼痛、减轻炎症和促进神经功能恢复。然而，现有的治疗方法，包括药物治疗、物理治疗和康复锻炼等，虽然能在一定程度上缓解患者的症状，但往往不能根治，而且治疗周期长，效果不稳定。因此，探索和开发新的、更有效的治疗方法对于改善NCLDH患者的预后至关重要。

黄柏碱具有抗氧化、抗炎和免疫调节等药理活性。它是黄柏属植物的主要活性成分之一。黄柏碱可减少参与炎症反应的关键介质的释放，如肿瘤坏死因子TNF-α、IL-6和IL-1β，从而减轻炎症。此外，它还具有神经保护作用，减轻神经元损伤和退行性改变，促进神经修复。然而，使用黄柏碱治疗NCLDH尚未见报道。NF-κB被认为是存在于所有动物细胞中的关键核转录因子。NF-κB转录因子家族成员包括p65 （RelA）、RelB、c-Rel、NF-κB1 （p105/p50）和p100/p52 （NF-κB2）蛋白，它们与DNA结合，调节下游基因转录。在NCLDH大鼠模型中，鞘内注射脂素A4可降低NF-κB p65蛋白的表达，降低炎症因子TNF-α的表达，同时增加TGF-β活性，从而减轻神经根性神经性疼痛。这一机制可能涉及调节炎症因子和抑制NF-κB通路以减轻疼痛。

本研究主要探讨黄柏碱治疗NCLDH模型的初步作用机制。近年来，大量研究表明，天然植物提取物及其活性成分在抗炎、镇痛和神经保护方面具有独特的优势。黄柏碱作为一种具有广泛药理活性的化合物，已被证明具有显著的抗炎和免疫调节作用，是治疗炎症相关疾病的有希望的候选者。

方法：采用自体尾髓核移植建立大鼠NCLDH模型。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定大鼠血清肿瘤坏死因子-α (TNF-α)和白细胞介素-1β (IL-1β)水平，并进行行为学观察和神经功能评分。采用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测核因子κ b (NF-κB) p65 mRNA在L5神经根及周围组织中的表达。Western blotting检测NF-κB p65、TNF-α蛋白表达。采用免疫荧光和免疫组织化学方法观察NF-κB p65蛋白在L5神经及其周围组织中的分布和表达。

PCR引物用于cDNA

造模后第2天大鼠神经功能评分（x±s）

造模后第2天大鼠神经功能评分（x±s）

黄柏碱消除干预14 d对NCLDH模型大鼠神经功能评分的影响（x±s）

黄柏碱对NCLDH患者血清炎症因子TNF-α (A)和IL-1β (B)的影响。注：* P<0.05, * * P<0.01

p65mrna在神经及周围组织中的相对表达。注：* P<0.05, * * P<0.01, * * P<0.001

黄柏碱对NCLDH中NF- κ B p65和TNF-α的影响。A, P65, TNF-α， β作用凝胶和印迹图像。B， NF- κ B p65和TNF-α的相对蛋白表达。注：* P<0.05, * * P<0.01, * * P<0.001

(A)大鼠免疫荧光图像；细胞核呈蓝色，p65阳性表达呈绿色（比例尺=50 μm），放大倍数为20倍；(B)各组大鼠p65阳性细胞数，与正常组比较，***P<0.001；与模型组比较，***P<0.001；C，大鼠免疫组化图像，p65存在的地方，p65存在的区域呈现棕褐色或棕色（DAB显色产生）；不含靶抗原的区域不会呈现棕褐色，但会呈现底色（浅蓝色、浅蓝紫色或微白），细胞核颜色：蓝色或蓝紫色（苏木精染色）（比尺=50 μm），放大倍数为20倍；D，各组大鼠P65蛋白表达情况，P65：与正常组比较，***P<0.001；与模型组比较，***P<0.001

结果：本动物实验发现，黄柏碱可下调p65 mRNA的表达，减少炎症因子的释放，减轻腰椎间盘突出症（LDH）所致的运动功能障碍。因此，黄柏碱技术对NCLDH的治疗具有潜在的价值。

结论：本动物实验发现，黄柏碱能显著降低p65 mRNA的表达水平，减少炎症因子的释放，减轻腰椎间盘疼痛。

原文来源：Tan P;  Mei J;  Wang DEvaluation of the effect of phellodendrin application on rats creating an experimental model of non-compression lumbar disc herniation on the NF-κB-related inflammatory signaling pathway.J Orthop Surg Res  19(1)

Tags： J Orthop Surg Res：黄柏碱对大鼠非压缩性腰椎间盘突出症模型的影响及其对NF-κ b相关炎症信号通路的影响