在口腔内，各种自然和人工表面被复杂的生物膜定植，唾液对于维持体内平衡至关重要。唾液除了具有消化、润滑、再矿化等功能外，还参与了唾液膜(salivary pellicle, SP)蛋白层的形成，SP是由唾液成分吸附在天然牙列和牙科生物材料表面形成的。SP对口腔表面的磨损保护、牙周伤口愈合调节、口腔表面细菌粘附等口腔基本结果有重要作用。目前，与天然牙齿相比，牙科材料在SP形成方面的研究较少，并且已知这些生物材料的理化特性会影响SP的组成和结构。不同类型的生物材料可以放置在口腔中，包括钛牙种植体。种植牙治疗是修复部分或全部无牙患者的一种可预测的治疗选择，可提供长期功能(10年以上)和美观。然而，由于口腔内有丰富的微生物，种植体容易受到污染，从而导致生物并发症，包括种植体失败。

一旦干净的种植体基台表面暴露于口腔，它立即被唾液膜覆盖，这反过来又显著影响微生物对钛基质的粘附。有报道称，细菌在牙种植体放置后30分钟内就能在钛表面定植，并能在几周内形成复杂的生物膜。在这方面，有大量证据表明种植体-基牙界面生物膜的积累可导致炎症细胞浸润，最终导致骨质流失。

鉴于SP在种植周健康中的基础性作用，本课题组此前报道唾液的存在抑制了口腔代表性细菌对钛膜的粘附。为了进一步了解唾液对钛表面的调节对口腔细菌粘附的影响，我们组在另一项研究中，对牙周健康和牙周炎受试者进行了不同微观结构的钛基质口腔内培养，发现参与这项研究的志愿者的牙周状态，从而唾液成分和微生物群，在这些底物上形成的生物膜中，在调节口腔物种的身份和比例方面比钛表面本身的表面特性更具决定性。因此，虽然口腔生物膜在微观结构的钛表面的形成并不直接取决于底物的特性，但形成唾液膜的蛋白质的数量和特性确实取决于底物的物理化学性质(如粗糙度和润湿性)。综上所述，这些观察结果支持了唾液/唾液膜-钛表面相互作用有助于钛牙种植体口腔生物膜的发展的断言。

研究获得性唾液膜过程非常重要，因为它将人工表面和牙齿表面与口腔环境连接起来，而且它对严重口腔疾病的发生有重要作用，包括糜烂、龋齿、牙周病和种植体周围感染。随着种植体修复体的使用越来越多，探索钛基质上SP形成的研究变得越来越重要。因此，有必要详细了解植入物界面与宿主流体发生的生物相互作用。本研究探讨了SP如何调节钛表面上由戈登链球菌、纳氏放线菌、核梭菌和牙龈卟啉单胞菌组成的生物膜的形成。

材料和方法：Ti底物与10名全身和牙周健康受试者的唾液样本孵育2小时。釉质底物作为生物参考。采用扫描电镜(SEM)和拉曼光谱(Raman spectroscopy)分析了唾液膜的形成过程。SP形成后，表面与戈登链球菌、纳氏放线菌、核梭菌和牙龈卟啉单胞菌混合孵育12小时。通过XTT法测定附着在每个表面的细菌细胞数量，使用LIVE/DEAD®BacLightTM试剂盒通过荧光显微镜分析细菌活力。

左表显示了唾液供体的牙周临床特征。右图为考马斯蓝染色的全唾液样本的代表性SDS聚丙烯酰胺平板凝胶分析，显示了供体唾液中不同唾液蛋白的分离模式和含量

参考二维凝胶图的人唾液蛋白的样本池。在还原条件下，在正交12% sds -聚丙烯酰胺凝胶上，采用等电聚焦(pH值3-10和4-7)和二次元分离蛋白质。用考马斯蓝R-250染色观察斑点。箭头表示存在某些蛋白质，这些蛋白质被认为是唾液淀粉酶(1)、珐琅质膜前体胱抑制素SA-III(2)、碱性富脯氨酸磷酸化蛋白(PRP)(3)、酸性PRP(4)和PRP(5)的不同异构体，仅根据先前报道的电泳迁移模式

介绍了用于所有测试的表面的主要特征(地形，Ra和WCA)，唾液膜形成和生物膜发育。钛表面是种植体颈部的代表，牙釉质表面作为生物表面参考

在37℃厌氧条件下，钛和搪瓷基质，无唾液膜(分别为A和C)，以及唾液膜覆盖的表面(分别为B和D)，培养12 h后形成的生物膜的荧光显微镜图像。图像为采用活/死染色法后贴壁细菌的显微荧光可视化。与唾液被膜覆盖的表面相比，在未被膜覆盖的表面(对照)上可以看到更多的细菌。比例尺10 μm

左图(A)显示了唾液膜覆盖的牙釉质表面的代表性显微照片。右侧(B)牙釉质表面的拉曼光谱(黑色光谱)，以及唾液膜覆盖的牙釉质表面的拉曼光谱(红色光谱)

Tags： Clin Oral Investig：唾液膜调节钛表面生物膜的形成