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1.检测前提:
很多分析前误差可导致APTT延长,如采集量不足、有血凝块、被其他抗凝或促凝剂污染等,应排除这些影响再进行纠正试验;对于轻度延长的APTT(即提示低滴度抗凝物或轻度的因子缺乏),纠正试验判断准确性不高,价值也有限,可能的话实验室应与临床医生共同确定一个触发检测纠正试验的APTT限值(如超出正常均值或上限值10秒)。
2.正常混合血浆(NPP)的制备:
若不能获得商品化NPP,可选择20例正常人血浆混合制备,应避免选择感染、肿瘤、创伤、术后、妊娠等人群标本,这类人群即使APTT在正常范围内,其各凝血因子间水平差异可能很大(如急性时相蛋白——VIII因子活性过高)。
3.建议简化试验步骤,推进试验开展:
a.关于温育试验:如果纠正试验明确仅用于狼疮抗凝物的筛选,则无需进行温育试验;如果确定患者无出血表现,也无需通过温育试验来筛选VIII因子抑制物。此外,VIII因子抑制物仅需10min即可使混合血浆APTT延长,因此标本混合后应立刻检测APTT。
b.温育时间:各种文献推荐温育1-2小时均可,建议选择1小时,既节省时间,也减少了非特异性凝血因子失活的影响。
c.混合比例:除1:1混合外,患者血浆与正常血浆按1:4及4:1混合或可有助于更准确地筛选低水平抑制物及因子缺乏,但如果实验室有条件进行特异性检查,则没有必要检测多个混合比例,不仅费时费力,结果解释也会变得复杂而不可靠,不如直接进行下一步特异性试验。
4.复杂情况的结果分析:
当同时存在多种抑制物或同时存在抑制物与因子缺乏时,结果解释将变得复杂,需结合其他凝血检查来分析。例如,若怀疑同时存在狼疮抗凝物与肝素,可通过凝血酶时间(TT)来鉴别;若怀疑同时存在狼疮抗凝物与多重因子缺乏(如肝病),可了解凝血酶原时间(PT)结果。总之,纠正试验毕竟仅用于筛查,不能确保100%准确判断。
哪些因素会影响凝血检测结果?
1. 生活习惯
饮食(例如动物肝脏类),吸烟、饮酒等也会影响检测;
2. 药物影响
(1)华法林:主要影响 PT 和 INR 值;
(2)肝素:主要影响 APTT,可延长 1.5 ~ 2.5 倍(进行抗凝药物治疗的患者,尽量在药物浓度降低或者药物过了半衰期后采血);
(3)抗生素:大剂量的抗生素使用可以造成 PT、APTT 的延长,有报道称青霉素含量达到 2 万 u/ML 血液时,可使 PT、APTT 延长 1 倍以上, INR 值也延长 1 倍以上(曾有报道静点头孢哌酮舒巴坦致凝血异常的案例)
(4)溶栓的药物;
(5) 输入脂肪乳类的药品可对检测结果干扰,遇到严重脂血标本可以通过高速离心来降低干扰;
(6)阿司匹林、双嘧达莫和噻氯匹啶等药物能抑制血小板聚集;
3. 采血因素:
(1)枸橼酸钠抗凝剂与血液的比例通常为 1:9,并充分混匀。有文献报道,抗凝剂浓度的增加或减少都对凝血功能检测有影响,血液量增加 0.5 mL 时可缩短凝固时间;当血液量减少 0.5 mL 时可延长凝固时间;
(2)一针见血,防止组织损伤,外源性凝血因子混入;
(3)压脉带时间尽量不要超过 1 min,压脉带压得太紧或时间太长,会因结扎使因子Ⅷ和组织纤溶酶源激活剂(t-pA)释放,注入血液太用力也会是血细胞破碎激活凝血系统。
4. 标本放置的时间和温度影响:
(1)凝血因子 Ⅷ、Ⅴ 及其不稳定,随着放置时间延长,保存温度升高,凝血活性逐渐消失,因此血凝标本采集后 1 小时内送检,2 小时内完成检测,以免引起 PT、APTT 延长。
(2)不能及时检测标本应分离血浆加盖冷藏 2 ℃ ~ 8 ℃ 保存。
5. 中/重度溶血、脂血标本
发生溶血的样本具有与血小板第 Ⅲ 因子相似的凝血活性,可以缩短溶血血浆的 TT、PT、APTT 时间,降低 FIB 含量。
6. 其他
低温、酸中毒和低钙血症均可导致凝血酶和凝血因子不能有效发挥作用。
凝血结果异常就一定会出血吗?
正常人凝血功能的代偿能力强大,临床上,只要纤维蛋白原浓度 > 0.8 g/L,凝血因子活动度大于正常的 30%,凝血因子在正常水平的 40% ~ 50% 时候,血小板计数不小于 30 × 109/L.即使 PT 和 APTT 值有所延长,凝血功能仍可维持正常。
对一些获得性或者遗传性的凝血因子缺乏,上述指标可以出现假阳性或假阴性。
例如,仅是凝血因子Ⅱ缺乏时,患者可以出现 APTT 延长,却基本不存在浸入性操作或手术出血的风险;另外一种情况则是,当凝血因子 ⅩⅢ 和 α2-抗纤维蛋白溶酶缺乏时,患者的 PT 和 APTT 均为正常,但侵入性操作或手术却可以导致致命的大出血。
但是,有出血风险的人群一般平素会有出血史,例如鼻出血、牙龈出血、皮下出血等。所以询问病史很重要。
凝血异常时为什么需要关注肝功?
肝脏是合成蛋白的主要场所,凝血因子多为蛋白质,因此肝脏是凝血因子合成的重要场所。当维生素 K 依赖因子缺乏时,可引起一系列的凝血因子缺乏;肝脏病变时,抗纤溶酶减少,纤溶酶活性增加,纤维蛋白溶解加速,可引起一系列的凝血因子缺乏;
肝功能受损时,血小板生成素合成减少,造成血小板质和量的改变,进而会出现凝血障碍。
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