听力损失是全球性的重大健康负担，常由遗传因素及噪声暴露、耳毒性药物使用等多种外部因素引起。近年来，腺相关病毒（AAV）介导的基因治疗为内耳疾病的治疗提供了新的希望。AAV作为一种非致病性病毒载体，具有高转导效率、长期稳定表达、低免疫原性和良好的安全性等优势，已成为基因治疗领域中最有前景的平台之一。尤其在内耳疾病治疗中，AAV能够通过局部递送方式将治疗性基因精准导入耳蜗内的靶细胞，如感觉毛细胞、支持细胞和螺旋神经元等，从而实现遗传性或获得性听力损失的干预与修复。

AAV载体的发展经历了多个阶段的优化与创新。研究人员通过定向进化、肽段插入和理性设计等策略对AAV衣壳进行工程化改造，显著提升了其组织趋向性和转导效率。例如，PHP.B血清型在中枢神经系统和耳蜗内毛细胞中表现出极高的感染效率，但在外毛细胞中的转导效果较差；AAV2.7m8则对内外毛细胞均具有较高的转导能力，且在成年小鼠中仍能维持较好的表达效果；Anc80L65在新生小鼠中可实现对内外毛细胞的近乎完全转导，但在成年小鼠基底区域的外毛细胞中转导效率下降。此外，新型血清型如AAV-ie和AAV-KP1显示出对支持细胞的高效靶向能力，为毛细胞再生研究提供了重要工具。启动子的选择也对基因表达的细胞特异性起到关键作用，广泛应用的CMV和CAG启动子虽然能够驱动基因在多种细胞中表达，但缺乏细胞类型特异性，而如Myo15启动子则能够特异性在毛细胞中驱动转基因表达，显著降低了脱靶效应。

在递送方法方面，圆窗膜注射（RWM）因其操作相对简便、创伤小，成为小鼠和临床研究中常用的AAV递送途径。半规管开窗术和耳蜗开窗术等方法也被用于提高病毒在靶区域的分布，但各有其适用范围与局限性。系统性递送方式如静脉注射虽然避免了直接手术损伤，但可能需要较高病毒滴度且存在脱靶风险。近年来，外泌体包裹的AAV（Exo-AAV）和磁性靶向AAV等新策略也在提高转导效率和避免中和抗体影响方面显示出潜力。

图：AAV发展与不足概述

尽管AAV介导的基因治疗显示出巨大潜力，但其应用仍面临多项挑战。AAV的包装容量限制（约4.7 kb）使得大基因如OTOF（约6 kb）无法通过单一载体递送，研究人员因此开发了双AAV策略，包括DNA转接、重叠和杂交等方法，通过同源重组或蛋白质反式剪接实现大基因的完整表达。此外，AAV的细胞靶向特异性仍有待提高，脱靶转导可能导致内耳稳态紊乱或毒性反应。中和抗体（NAbs）的存在也是临床应用中需重视的问题，尤其是对于需重复给药或已有预存抗体的患者。尽管局部注射可降低系统性免疫反应，但抗体滴度升高仍可能影响治疗效果。此外，AAV基因组多以附加体形式存在，整合率低，长期表达稳定性及再给药策略仍需进一步研究。

在治疗策略方面，AAV介导的基因治疗主要包括基因替代、基因沉默和基因校正三种方式。基因替代适用于常染色体隐性遗传性听力损失，如DFNB9（OTOF突变）、DFNB7/11（TMC1突变）等，通过AAV递送正常基因拷贝至靶细胞恢复功能。基因沉默则主要用于常染色体显性遗传性听力损失，如DFNA36（Tmc1 Bth突变），通过RNA干扰或CRISPR-Cas系统抑制突变等位基因的表达。基因校正是最精确的治疗手段，通过碱基编辑技术直接修正点突变，如在小鼠模型中成功恢复Pcdh15和Myo6突变引起的听力功能。此外，AAV还被用于毛细胞再生和获得性听力损失的预防性干预，例如通过调控Atoh1、Pou4f3、Gfi1等基因促进支持细胞向毛细胞分化，或通过抗氧化、抗凋亡基因的过表达抵抗噪声和耳毒性药物引起的损伤。

近年来，多项临床 trials 在AAV介导的内耳基因治疗方面取得突破性进展。例如，针对DFNB9患者的AAV1-hOTOF双载体基因替代治疗通过圆窗膜注射显著改善了患者的听觉脑干反应阈值，部分患者甚至恢复了部分语言识别和声源定位能力。这些初步临床结果展示了AAV基因治疗在遗传性耳聋治疗中的巨大潜力，也为其他内耳疾病的治疗提供了重要参考。

尽管AAV介导的内耳基因治疗仍面临包装容量、靶向特异性、免疫反应等多重挑战，随着衣壳工程、启动子设计、递送策略和基因编辑工具的不断进步，其应用前景十分广阔。未来研究需进一步明确AAV在人内耳中的转导特性、长期安全性与有效性，并探索多基因调控、诱导表达系统等策略，以实现更精准、安全和持久的治疗效果。综上所述，AAV介导的基因治疗不仅为遗传性听力损失患者带来了新的希望，也有望在获得性听力损失的预防和再生治疗中发挥重要作用。

原始出处：

Fan Wu, Wuhui He, Yun Xiao, Qiong Wu, Qing Zhang, Tiesong Zhang, Lei Xu, Xinyi Pang. Exploring AAV-Mediated Gene Therapy for Inner Ear Diseases: from Preclinical Success to Clinical Potential. *Advanced Science*, 2025, 12, e08397. DOI: 10.1002/advs.202408397.

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Tags： Advanced Science：从临床前成功到临床潜力，我国学者探索AAV介导的内耳疾病基因治疗