原发性肝癌是全球常见的恶性肿瘤，其中肝细胞癌（hepatocellular carcinoma。HCC）占原发性肝癌的75%～85%。早期确诊的HCC患者通过移植或切除手术，五年生存率可达70%，而晚期HCC患者仅能接受姑息治疗，中位生存期少于一年。因此，HCC的早期检测可以显著提高患者的生存率。肝脏超声是高危人群中 HCC 监测的推荐策略，但在检测早期HCC方面效果较差，其对于早期HCC的检测灵敏度仅为47%。联合超声和血清甲胎蛋白检测早期HCC的灵敏度达到63%，但仍有提升空间。GALAD评分是一种基于血液生物标志物的模型，在检测早期HCC方面优于超声，其曲线下面积（AUC）为0.92（灵敏度92%，特异度79%）。尽管GALAD评分在早期检测HCC方面表现良好，但由于慢性乙型肝炎病毒感染是HCC的主要原因，因此其在中国人群中的表现仍需全面验证。因此，迫切需要一种适用于中国人群的非侵入性、高灵敏度和特异度的HCC检测方法。

DNA甲基化是一种调节基因表达的表观遗传机制。肿瘤抑制基因的超甲基化是许多癌症致癌过程中的早期事件。循环游离DNA（cfDNA）是从坏死、凋亡或活细胞中释放出的细胞外核酸片段。循环肿瘤DNA（ctDNA）来源于肿瘤细胞，占cfDNA的一小部分。研究表明，血浆中ctDNA的甲基化水平与原发肿瘤细胞数量呈正相关。cfDNA甲基化模式作为非侵入性癌症筛查和监测的生物标志物具有巨大潜力。因此，本研究旨在筛选表现优异的甲基化基因，开发一种成本效益高的MS-qPCR检测HCC方法，并通过与目前使用的生物标志物（包括AFP、AFP-L3、DCP和GALAD评分）进行比较来验证其表现。

本研究为一项五期病例对照研究，通过捕获测序、TCGA/RNA-seq筛选、技术验证（MS-qPCR/Sanger 法）和生物学验证（四重MS-qPCR法）识别HCC甲基化生物标志物。基于组织发现队列（43例肝细胞癌，32例正常）的差异甲基化表达筛选出甲基化生物标志物，并在血浆验证队列（第1期：53例肝细胞癌，52例肝硬化，20例良性病变，50例健康病变；第2期：67例肝细胞癌，81例肝硬化）中进行验证。将最终检测方法的HCC检测性能与现有的血液监测方法进行比较。

研究人员鉴定出两个甲基化基因OSR2和TSPYL5以及一个新的内部参考基因SDF4，并开发出名为Qliver的MS-qPCR检测方法。Qliver在1期血浆队列中区分HCC患者与非HCC患者的AUC为0.955（95% CI：0.924-0.987），灵敏度为 88.68%（95% CI：76.97%-95.73%），特异性为 89.34%（95% CI：82.47%-94.20%）；在2期血浆队列中区分HCC患者与肝硬化患者的AUC为 0.958（95% CI：0.927-0.989），灵敏度为 88.06%（95% CI：77.82%-94.70%），特异性为 92.59%（95% CI：84.57%-97.23%）。对于1期及以上血浆疗法2期队列，Qliver在健康个体、肝硬化患者和良性肝病患者中检测HCC的AUC至少为0.958，优于GALAD评分（AUC：0.777至0.849）。对于BCLC 0期及A期HCC患者，Qliver的灵敏度为62.50%（95% CI：24.49%-91.48%）至72.73%（39.03%-93.98%），特异性为90%。总体而言，Qliver在肝硬化病史、肿瘤分期、肿瘤大小和肿瘤计数方面均优于AFP、AFP-L3、DCP和GALAD评分。

图1：肝硬化患者中跨阶段检测肝细胞癌的新型双靶标血液检测的发现和验证流程图

综上所述，本研究开发并验证了一种名为Qliver的MS-qPCR检测方法，该方法包含OSR2、TSPYL5和SDF4，用于在独立的血浆队列中检测肝细胞癌。与目前广泛使用的血液生物标志物相比，Qliver在检测HCC方面表现出了更优异的性能，表明其在高危人群的HCC监测中具有潜在的临床益处。

原始出处：

Teng W, Li H, Yang H, Chen Y, Xi L, Xin F, Zhang A, Yu L, Zheng L, Wang M, Bai J, Ke F, Wang Y, Sun F, Zhang H, Wu L, Liu J. Discovery and validation of a novel dual-target blood test for the detection of hepatocellular carcinoma across stages from cirrhosis. BMC Med. 2025 May 12;23(1):278. doi: 10.1186/s12916-025-04115-w. PMID: 40350453.

Tags： BMC Med.：中国学者开发了一种用于检测肝硬化各阶段肝细胞癌的新型双靶血液检测方法