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前 言
AFP作为一种最经典的肿瘤标志物,其检测结果一直受到临床医生的重视和患者的高度关注,也是人们健康体检的一种常规检测项目,而有肝病史的人群更关心其定量测定的结果,其检测结果的稳定性和准确性与患者的利益密切相关,假阳性或假阴性结果会给临床医生和患者错误的提示,延误治疗或影响疗效判断。下面就1例工作中遇到的同一份样本,AFP前后结果差异较大的案例进行分析。
案例经过
2023.1.28,在肝癌早筛的报告审核过程中发现这样一例结果AFP>1200ng/mL,AFP-L3%>1200ng/mL,AFP/AFP-L3%>10%(均大于检测上限),患者为我院中医科患者,诊断为肝积。见图1,与图2 2023.1.3号肝癌早筛结果相差较大。
图1
图2
仪器为热景C2000化学发光免疫分析仪,试剂为热景公司生产的甲胎蛋白异质体比率(AFP-L3%)测定试剂盒(简称AFP-L3%试剂),随即用热景公司生产的甲胎蛋白测定试剂盒(简称AFP试剂)进行AFP的复测,结果为60.42ng/mL,见图3。
图3
两种试剂盒的方法学均为磁微粒化学发光免疫分析法,所测得的结果相差甚大,这时查看患者其他化验结果见图4-7。希望能给签发报告有一些提示。
图4
图5
图6
图7
凭经验判断,血小板正常,血红蛋白,肝功能以及肝纤维化异常,DD危急值,认为这可能是肝硬化失代偿期或者急性重症型肝炎,加上1.3号的肝癌早筛结果,认为AFP为60.42ng/mL这一结果更准确,随即用两种试剂盒再次重测,AFP-L3%试剂结果仍然是AFP>1200ng/mL,AFP-L3%>1200ng/mL,AFP/AFP-L3%>10%,AFP试剂结果为69.88ng/mL(编号Y2880图8),两种试剂检测结果还是不一致,到底哪一个才是患者的真实结果呢?
图8
案例分析
联系临床大夫询问相关病情,该患者主要病史为长期慢乙肝,B超提示肝脏有占位病变,此时之前的猜测全部推翻,考虑AFP试剂盒对AFP的测定是否存在干扰造成了一个假性低值,鉴于上述检测结果,首先考虑HOOK效应。
HOOK效应是指由于抗原抗体比例不合适而导致的假阴性或弱阳性现象,据文献报道,消除或减弱HOOK效应常用的有4种方法:(1)把一步法改为两步法;(2)往检测系统中加入更多的标记抗体;(3)计算机动态速率分析;(4)标本稀释测定法[1-3]。在这4种方法中,前三种都涉及检测系统厂家,只有标本稀释测定法是临床实验室人员可以直接采用的最高效、简便的方法。
处理过程:
将样本进行50倍稀释:AFP试剂结果为AFP>60000ng/mL;AFP-L3%试剂结果为AFP>60000ng/mL,AFP-L3>60000ng/mL,AFP-L3%>10%(编号Y2880*50)。
再次进行100倍稀释:AFP试剂结果为>120000ng/mL,AFP-L3%试剂结果为AFP>120000 ng/mL,AFP-L3>120000 ng/mLAFP-L3%>10%(编号Y2880*100)。
再次进行500倍稀释:AFP试剂结果为AFP>600000ng/mL,AFP-L3%试剂结果为AFP>600000ng/mL,AFP-L3>600000ng/mL,AFP-L3%>10%(编号Y2880*500)。
再次进行1000倍稀释(仪器最高显示稀释倍数为999):AFP试剂结果为>1198800ng/mL,AFP-L3%试剂结果为AFP>1198800ng/mL,AFP-L3>1198800ng/mL,AFP-L3%>10%(编号Y2880*1000)。见图8
随着稀释倍数的不断增高,AFP的结果成比例不断增高,上述AFP试剂盒测定的AFP结果明显是因HOOK效应引起的弱阳性结果。经过进一步稀释后即可得出准确结果而未发生HOOK效应。在AFP试剂盒说明书中标注“当AFP浓度超过4687.5ng/mL时会出现HOOK效应。见图9”此患者如此高浓度的AFP只做原倍而不稀释,HOOK效应是避免不了的。
图9
反思:AFP-L3%试剂盒说明书中标注:“当AFP浓度和AFP-L3%浓度在6000ng/mL以下时不会出现HOOK效应”见图10,而此患者AFP以及AFP-L3%浓度显然远远超过了6000ng/mL,那么1.3号患者首次肝癌早筛的报告也是因为HOOK效应造成了一个不准确的值,联系临床大夫对1.3号的错误结果给予解释,并得到谅解。此次问题解决的一个突破点是:B超提示有占位病变,但是在与临床大夫沟通之前,这些对我们有用的信息很难知道,很容易因方法学的干扰造成结果的误报。
图10
结 论
检验科存在样本量大,看不到临床患者的病历资料以及方法学干扰等弊端,因此无法做到对每一份不正常样本进行复检,尤其是HOOK效应引起假阴性或弱阳性的结果更是容易误报,建议临床科室对有疑议的结果要及时跟检验科沟通。实验室人员应高度重视临床反馈,关注每种检测方法的局限性,切实做好质量控制,有必要时检验人员要对原始标本进行原液复测及稀释后复测,以免影响病情的诊断和治疗。
专家点评
点评人:太原市第三人民医院检验科主任陈爱英
HOOK效应对AFP的干扰是工作中较为少见的现象,本文就工作中遇到的两种试剂不相符的结果进行探讨,寻找原因,最终给临床提供准确结果,由于HOOK效应的发生具有不可预见性,避免HOOK效应一直是临床实验室人员较为棘手的问题。临床医生如能在怀疑患者发生肝癌时,或者临床症状和B超已经有明显的的提示时,应在检验申请单上提示该信息,避免因不准确的检验结果对临床诊断造成困惑,也有助于实验室人员及早发现问题。
参考文献
[1] Roy R D, Rosenmund C, Stefan M I. Cooperative binding mitigates the high-dose hook effect[J]. Bmc Systems Biology, 2017, 11(1):74.
[2] Gao Y, Zhu Z, Xi X, et al. An aptamer-based hook-effect-recognizable three-line lateral flow biosensor for rapid detection of thrombin[J]. Biosensors & Bioelectronics, 2019, 133:177-182.
[3]陈林坤,沉稳,蔡雷鸣,等.血hCG高剂量HOOK效应1例报道及文献复习[J].检验医学与临床, 2020, 17(4):2.
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