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临床生化检验过程中,你是否遇到过病人标本检测HBDH酶活性大于LDH酶活性,你该如何向临床医生解释这一现象?
案件经过
某天早上,一心肌梗死病人急查生化血如下:
仔细看病人化验报告,发现该病人HBDH酶活性647U/L,大于LDH酶活性637U/L,如下图:
检验人都知道,HBDH活性代表乳酸脱氢酶同工酶LDH1和LDH2活性,从某种意义上讲,HBDH是LDH的一部分,理论上HBDH是不可能大于LDH,那出现这种现象,我们该如何分析呢?
案例分析
要解释HBDH>LDH,首先我们要弄清楚两种酶检测方法和原理。
首先,LDH检测有速率法,电泳法,色谱法等,一般全自动生化仪采用的是速率法,方便自动化检测。本实验室试剂说明书检测原理如下:LDH催化L-乳酸与NAD+反应生成NADH。NADH在340nm处有特异吸收峰,其生成的速率与血清中的LDH的活性成正比(L-乳酸 + NADH+ →丙酮酸+NADH+H+)。
此方法测定酶在正反应中NAD的还原速率(L→P),称L法。同理,可测定酶在逆反应中NADH的氧化速率(P→L),称P法。需要注意的是,LDH检测如果用P法平均比用L法高大约2.2倍(正逆反应速率不一致)。IFCC推荐的LDH测定参考方法是基于L→P的反应,也就是L法,此法在国内临床实验室中广泛应用,本实验室也是如此。而就L法检测LDH总活性,目前市面上试剂也分两大类,一类以丙酮酸为底物,一类以乳酸为底物(本实验),由于底物不同,所测得LDH活性也有差异。参照试剂说明书和本实验验证结果,以丙酮酸为底物检测LDH时,LDH参考范围200~380U/L;以乳酸为底物检测LDH时,LDH参考范围120~250U/L。从这里可以看出不同反应模式,不同底物所检测的LDH活性不同。
本实验HBDH检测亦使用速率法,其原理如下:NADH + ɑ-酮丁酸 + H+ → ɑ-羟基丁酸 + NAD+ 通过测定在340nm处NADH的下降速率来计算ɑ-HBDH的活性,其吸光度变化率(ΔA/min)与样本中ɑ-HBDH活性成正比。需要注意的是,LDH用的L法是美国系统的,纯美国公司是没有HBDH这个试剂的,HBDH只在欧盟国家开展这个项目。
从检测原理可以看出,两个指标在各自的体系内测定。我们需要强调的是,LDH、HBDH测定的是酶活性水平,由于酶活性水平受很多因素影响,因此活性水平不能绝对地等同于浓度水平,也许HBDH测定体系内添加有激活剂,HBDH活性>LDH活性就不足为奇了。如果是用免疫学方法检测两者的浓度水平,那么HDBH浓度就不可能大于LDH浓度了(理论与实际符合)。虽然HBDH活性代表乳酸脱氢酶同工酶LD1和LD2活性,由于测量时的底物不同,以a-羟丁酸为底物时比以乳酸为底物时的HBDH的催化活性更大,所以HBDH的结果比LDH的大,由于底物不同,所以酶的单位定义不同,因此HBDH>LDH为正常现象。当然临床工作中,HBDH>LDH时,一般不会超过多少,如果选用P法检测LDH,则不会出现此种情况。当然结合实际,如果出现此情况,又不想与临床医生产生不必要的解释和误会,可以适当降低HBDH活性值,使HBDH<LDH(个人意见,仅供参考)。
总结
所以实际工作中若出现HBDH>LDH,我们可以从以下三个方面考虑:
1,方法学。由于逆向反应速度快,所以测定值两倍于正向反应,一般LDH都是用正向反应 ,也就是LDH-L法,而α-HBDH测定相当于逆向反应。所以虽然有α-HBDH高于LDH-L的情况,但是应该不会高于LDH-L×2。
2,底物不同。HBDH测定的是LDH1和LDH2活性之和,因采用的底物不同,并不等于以乳酸为底物时LDH1和LDH2的活性,而是LDH的H亚基作用于另一种底物的反应。
3.乳酸脱氢酶几种同工酶的最适pH不同,测定总的LDH时并不一定是几种LDH同工酶最大活性相加。
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