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临床病史
患者 男,66岁。因“咳嗽20天”入院。既往有吸烟史50年,每日10支,至今未戒烟。
入院CT:提示双肺多发结节影,建议进一步检查。
PET-CT:
右侧肺下叶(27mm×28mm×29mm)、左侧肺上叶结节状高密度影(22mm×12mm×14mm)伴钙化,葡萄糖代谢异常增高,不除外恶性病变,建议活检;纵隔、双侧肺门多个稍大淋巴结(长径5mm-26mm),葡萄糖代谢增高,不除外多发淋巴结转移;双肺多发小结节(最大长径7mm),未见葡萄糖代谢增高,不除外双肺多发转移。
入院行气管镜活检及肺泡灌洗,活检由于病变部位较深,肿瘤部位较深,支气管镜取材受限,仅在黏液组织内查见少许纤毛柱状上皮细胞及淋巴细胞。组织量极少,无法诊断。

图1
肺泡灌洗不受部位限制,收集细胞较为充分,作为组织学有利补充,查见恶性肿瘤细胞,细胞学提示非小细胞癌。结果如下所示:

图2.查见蜂窝状排列的纤毛柱状细胞及箭头所示病变细胞,细胞核大,核浆比增高,核膜不规则。

图3.再次寻找,发现呈团排列的异型细胞,细胞核大,核浆比高,核膜不规则,核仁明显。
虽考虑恶性肿瘤,但细胞形态不典型,肿瘤类型不明显,液基仅能诊断恶性肿瘤,细胞虽分化差,但仍有胞浆,且染色质非胡椒盐样,可排除神经内分泌肿瘤,考虑非小细胞癌,无法区分鳞癌、腺癌。
由于标本获取不易,为进一步明确,尝试用液基剩余标本离心沉淀收集全部细胞成分,但肺泡灌洗液不如胸腹水收集细胞容易,细胞成分依旧很少,遂用琼脂包成细胞蜡块。
细胞蜡块结果


图4、图5.包埋显示肿瘤细胞大小不一致,极向紊乱,细胞核浆比高,核膜不规则,考虑恶性肿瘤,但仍无明显鳞状细胞癌分化的巢团状或者角化证据,也无腺腔等腺细胞癌分化证据。
为求进一步诊断,遂用细胞蜡块进行免疫细胞化学标记:Syn(-);P63(-),CK7(+),P40(-),TTF-1(+),NapsinA(+)。
排除鳞状细胞癌、小细胞癌,证实为腺癌,结合形态、免疫细胞化学染色及临床病史,考虑肺原发。

TTF-11

CK7

NapsinA
讨论
患者老年男性,肿瘤部位深,气管镜取材受限,肺泡灌洗液与组织相互补充,最终患者诊断明确。患者肿瘤转移,错过手术最佳时期,经过肺泡灌洗液包埋蜡块并免疫细胞化学,腺癌诊断明确,可后续内科进行抗肿瘤治疗。
患者肺泡灌洗液液基细胞学及细胞蜡块技术与组织学相互弥补,取长补短,避免了患者承受再次创伤活检的痛苦。后续细胞蜡块可以像组织学一样进行免疫细胞化学检测,给出精准诊断,并且还可以利用细胞蜡块进行基因检测并进行靶向治疗。
细胞蜡块在非妇科细胞学中意义重大,制做良好的细胞蜡块是病理诊断过程中必须掌握的技术。胸腹水细胞蜡块技术相对成熟,大部分医院技术可以制片,但遇到像尿液、肺泡灌洗液、脑脊液等样本量极少的情况,普通细胞蜡块技术难以成片,需要病理技术工作者不断探索,才能让极少量的细胞有基质可以依托,进而包埋成蜡块从而制成病理切片。
此次试验较为成功,故整理思路供广大病理工作者参考。以下附琼脂细胞蜡块包埋制作方法。
肺泡灌洗液细胞琼脂包埋步骤
1.琼脂加热,将加热器调制85℃,装有琼脂的容器放入加热器中加热,琼脂固态变为液态加热停止。

2.将TCT保存液瓶中剩余液体 (肉眼观察不少于 1 mL并有肉眼可见的漂浮组织碎片)收集
在离心管中;

3.以 1250 r/min离心5min,弃上层液体 ;
4.生理盐水漂洗沉渣,以1500r/min离心5min,弃上层液体;

5.将细胞沉淀物加入85℃液态的琼脂内,立即离心1250 r/min离心 30s,离心后将含有琼脂的容器放置室温冷却10min,可见成团的细胞沉渣,取最低处琼脂和细胞团块,用棉纸包好,常规脱水,石蜡包埋,常规制片,染色。

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