在全球范围内，肝癌是第六大常见恶性肿瘤和第三大癌症致死原因。其中，肝细胞癌（HCC）是最常见的原发性肝癌类型。由于早期症状隐匿，多数患者在确诊时已处于中晚期，治疗效果差，预后不佳。目前临床上常用的血清甲胎蛋白（AFP）检测和超声检查在早期肝癌检测中的敏感性和特异性有限，亟需更高效、便捷的早期筛查手段。

近年来，液体活检技术——尤其是循环肿瘤DNA（ctDNA）检测——在肿瘤早期诊断中展现出巨大潜力。然而，究竟是基于ctDNA的基因突变还是甲基化标记更适用于肝癌的早期识别？如何将复杂的测序技术转化为适用于临床的简便检测方法？这些问题一直是研究的热点与难点。

近日，一项发表于Journal of Hematology & Oncology杂志的多中心研究给出了明确答案。该研究由复旦大学附属中山医院、华大基因等五家单位联合完成，共纳入1965名参与者，包括629名肝癌患者和1336名对照组（包括健康人、慢性乙型肝炎、肝硬化及良性肝病患者），系统比较了ctDNA突变与甲基化在肝癌检测中的效能。

研究首先通过并行超深度靶向测序与靶向亚硫酸氢盐测序分析发现，基于ctDNA甲基化的模型在检测肝癌方面显著优于突变模型。在测试集中，甲基化模型的灵敏度高达92.1%，而突变模型仅为63.7%；在早期肝癌中，甲基化模型的灵敏度也达到90.0%，远高于突变模型的58.8%。更值得注意的是，将突变与甲基化结合并未带来额外增益，提示甲基化标记本身已具备较强的独立诊断能力。

图：适用于临床的肝细胞癌ctDNA诊断模型的多阶段开发

基于这一发现，研究团队进一步开发了一种名为MBA-seq的多重PCR联合亚硫酸氢盐扩增子测序技术，仅使用25个甲基化标记即可实现高效检测。在测试集中，该模型的AUC值达到0.958，灵敏度为86.7%，特异性为90.1%，显示出优异的综合判别能力。

然而，MBA-seq虽准，但仍依赖测序平台，成本较高、流程复杂。为实现更便捷的临床应用，研究团队进一步筛选出两个最具判别力的甲基化基因——OTX1 和 HIST1H3G，并基于此开发了名为 “HCCteet” 的定量甲基化特异性PCR（qMSP）检测方法。这一方法不仅样本需求量少、成本低、检测速度快，更在验证中展现出与MBA-seq相媲美的性能：AUC为0.925，灵敏度78.4%，特异性93.0%，显著优于AFP检测（P < 0.001）。

表：突变模型、甲基化模型、MBA模型及HCCtect模型在HCC诊断中的性能表现、

尤其值得关注的是，HCCteet在早期肝癌检测中同样表现优异，对早期肝癌的检测灵敏度达69.5%，特异性维持在93.0%。此外，在AFP检测为阴性的肝癌患者中，HCCteet仍能识别出74.8%的总体肝癌和80.9%的早期肝癌，显示出强大的补充诊断价值。

在鉴别诊断方面，HCCteet能够有效区分肝癌与慢性肝炎或肝硬化等良性肝病，AUC为0.890，灵敏度78.4%，特异性87.0%，为高风险人群的长期监测提供了可靠工具。

综上所述，这项研究不仅明确了ctDNA甲基化在肝癌早诊中的优势地位，更通过技术迭代，成功将复杂的测序技术转化为适用于临床的简便、低成本双基因qMSP检测方法——HCCteet。该检测具备高灵敏、高特异、易操作、低成本等优点，在未来有望成为肝癌早期筛查和高危人群监测的重要工具，推动肝癌防控进入“精准、普惠”的新阶段。

原始出处

Guo, D., Huang, A., Sun, J. et al. The genomic and epigenomic abnormalities of plasma cfDNA as liquid biopsy biomarkers to detect hepatocellular carcinoma: a multicenter cohort study. J Hematol Oncol 18, 94 (2025). https://doi.org/10.1186/s13045-025-01747-6

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Tags： J Hematol Oncol：突破性液体活检技术，双基因甲基化检测助力肝癌早诊