一例显微镜下的裂痕

图1

图2

存在问题：

细胞间隙增大，出现条状裂隙，细胞打滚，病灶组织形态改变。

20年前刘彤华院士凝眸处，一张素朴的HE切片静卧灯下。那年轻患者命运的天平上，悬着"肿瘤"的千钧重担。一纸诊断如春风，拂去了沉压青枝的霜雪，让生命重回抽芽的晨光。避免过度诊疗。而今镜下的山河却生了裂隙。龟甲纹在黏膜平原蔓生，细胞在百叶窗的栅影间滚落成珠。纵是华佗再执银刀，敢问哪位仁心圣手，能在碎璃满地的玻片中，复刻当年那笃定的光？

这裂痕究竟怎么来的？

查阅文献，早有记载，我们却捧着火种，在明镜台前摸索了漫漫长夜，无动于衷。刘婷婷等^[1]和戴炜力等^[2]已经告诉我们由于消化道内镜活检标本体积一般较小、石蜡制片步骤繁多，需要病理技术人员在固定、取材、脱水、包埋、切片以及染色等各个环节中认真对待小标本的特殊性。究其原因往往与组织脆性增加有关，若将此蜡块再行低温冷冻后切片，此种裂隙则更为明显和严重。

究其龟裂或细胞打滚原因细细分析：

人（人员）：

取材处理

未及时固定（离体>30分钟）

全类型裂隙（自溶基础）

包埋定向

黏膜非垂直包埋（斜切）

哈密瓜皮样裂隙

切片操作

切片角度>10°或用力过猛

百叶窗样震颤裂隙

冷冻控制

蜡块冰箱或冷冻台-20℃冷冻>30分钟

龟壳状中心裂隙

机（机器与工具）：

脱水机

温控失灵（>35℃）

全类型裂隙（热损伤）

切片机

刀座松动/导轨磨损

百叶窗样平行裂隙

冷台

温度≤-25℃（过度冷冻）

龟壳状放射状裂隙

水浴锅

水温>45℃（展片熔化过度）

哈密瓜皮样网裂

料（试剂材料）：

固定液

福尔马林浓度<8%（市售稀释）

全类型裂隙（固定不足）

脱水剂

无水乙醇含水量>5%（脱水不彻底）

龟壳状空洞裂隙

透明剂

二甲苯等透明剂含杂质（酸化）

哈密瓜皮样细裂隙

石蜡

熔点过高或含聚合物杂质

百叶窗样拉裂

刀片

一次性刀片反复使用（>10块/刀口）

百叶窗样毛边裂隙

法（方法）：

脱水程序

梯度跳跃>20%（如70%→90%）

全类型收缩裂隙

透明时间

浸泡时间过长/梯度跳跃

龟壳状脆裂

浸蜡/包埋流程

高温浸蜡（>65℃）或时间不足

哈密瓜皮样表面裂隙

冷冻方法

蜡块直接接触冷台金属面/脱模后冰箱冷冻组织

龟壳状中心冰晶裂隙

切片方法

蜡块四周余蜡未削干净

组织震颤

染色程序

烤片温度>80℃（热应力裂）

百叶窗样延展裂隙

环（环境）：

温度

切片室>28℃（石蜡软化）

百叶窗样褶皱裂隙

湿度

湿度<30%（组织静电脆化）

哈密瓜皮样粉状裂隙

震动

操作台面晃动（持续震动）

震颤，不规则裂隙

综上对照自己实验室发现该现象同批次个别现象，原因分析：

（人）切片用力过猛，力求速度忽略切片质量。速度不均匀容易出现皱褶、碎裂等现象^[3]。

（机）冷台过冷。

（料）刀片一次性刀片反复使用（>10块/刀口）。

（法）蜡块直接接触冷台金属面/脱模后冰箱冷冻组织。制作切片时蜡块冷冻温度过低（以-5℃为佳），蜡块过硬、切片过程中组织出现裂隙^[3]。蜡块四周余蜡未削干净，残留余蜡使切片机夹头不能夹紧蜡块，导致切片出现“跳片”、震颤等改变^[4]。烤片温度>80℃（热应力裂）（图3），包埋高温浸蜡（>65℃）。包埋时蜡的温度太高（一般比所用石蜡熔点高1～2℃即可），组织烫伤或变硬变脆^[5]。

（环）湿度<30%（组织静电脆化）。

图3

解决办法：

戴炜力等^[6]已经告诉我们切片裂隙应用氨水补救方法，注意以下几项：

①粗修蜡块后，宜细切蜡片10余张并丢弃，以防后继细切蜡片产生空洞。

②因氨水处理后对蜡块作用只有深达表 面20～30μm，所以在此步骤之前必须退刀，细切出的蜡片也只能取前面3～5张。

③蜡片置入裱片机内，待充分展平后方可裱贴于载玻片，以防产生褶皱。

④尽管此法用时极短，但蜡片仍存留少量氨水， 因此染色前建议用流水先进行冲洗。

不过，基于该实验室的问题综合分析，将同一个蜡块按照正确方法进行重新切片：1. 使用蜡块修边仪或者包埋机平台充分烫削修去蜡块四周余蜡。

2. 切片时选择适合的切片厚度，组织薄切，速度缓慢且匀速，使用锋利刀片。 

3. 切片时蜡块冷冻后使用“哈气”和手捂的方法复温再切片，或者不需要冰冻，修片后直接在4度冰水浸泡（正好解决环境干燥问题）蜡块切面数秒再切片。

4.烤片调节72℃，30min。未使用氨水法问题已经解决。（图4、5）

图4

图5

 思考与讨论

其实，绝大多数实验室切片发生如斯龟裂细胞打滚的现象，只要调节对待组织蜡块“苛刻”的方式，按照正确的方法待组织以温柔者，必被真相温柔相待。

参考文献及书籍：

[1]刘婷婷,杨宁江.消化道内镜活检标本石蜡切片制作分析[J].中国继续医学教育,2019,11(31):99-101.

[2]戴炜力,王群姬.病理组织切片裂隙补救方法的技术改良[J].温州医学院学报,2010,40(02):173+176.

[3]王记红,王晓兰.影响不同组织常规制片质量的因素探讨[J].中国继续医学教育,2016,8(03):57-58.

[4]陈稳.介绍一种简便的组织蜡块修边法[J].临床与实验病理学杂志2020,36(3)：361-362.

[5]田玉旺,李琳,朱红艳,等.提高皮肤组织制片质量的技术探讨[J].诊断病理学杂志,2012,19(04):314-315.

[6]戴炜力,王群姬.病理组织切片裂隙补救方法的技术改良[J].温州医学院学报,2010,40(02):173+176.

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