HCC免疫治疗现状：HCC对免疫治疗的总体反应率较低，仅15%至35%的晚期HCC患者对免疫治疗有反应，且免疫治疗抵抗机制尚未完全明确。

Riplet基因沉默：Riplet基因在HCC中普遍因启动子超甲基化而沉默，这种沉默与HCC患者的预后不良相关。

脂肪代谢重编程：脂肪代谢重编程与肿瘤免疫逃逸有关，尤其是在TME中，脂肪酸积累可能影响免疫细胞的功能。

华中科技大学张必翔、丁则阳、张万广、黄昭等人研究Riplet（一种E3泛素连接酶）在肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma, HCC）中的作用，特别是其如何通过影响脂肪代谢和CD8 T细胞耗竭来促进HCC的发展以及对免疫治疗的抵抗。研究揭示了Riplet在HCC中的沉默机制、其对肿瘤微环境（Tumor Microenvironment, TME）的影响，以及如何通过联合治疗克服Riplet缺失HCC的免疫治疗抵抗。相关内容以“Riplet promotes lipid metabolism changes associated with CD8 T cell exhaustion and anti–PD-1 resistance in hepatocellular carcinoma”为题发表在《Science Immunology》上。

【关键结论】

Riplet缺失与HCC进展：Riplet在HCC中因启动子超甲基化而沉默，这种沉默与HCC患者的不良预后相关。Riplet缺失的小鼠表现出更多的肿瘤数量和更大的肿瘤直径，生存期缩短。

Riplet对免疫微环境的影响：Riplet缺失导致CD8 T细胞在肿瘤中的比例下降，同时这些T细胞表现出更高的耗竭标志物表达，如PD-1、TIM-3和CD39。

脂肪代谢与CD8 T细胞耗竭：Riplet缺失的HCC细胞表现出增强的脂肪酸合成，特别是棕榈酸（PA/C16:0）的积累，这些脂肪酸通过激活STAT3信号通路促进CD8 T细胞的终末耗竭。

联合治疗策略：通过使用FASN抑制剂C75，可以逆转Riplet缺失HCC中的CD8 T细胞耗竭状态，并与抗PD-1免疫治疗产生协同抗肿瘤效果。

【主要内容】

图1Riplet表达下调与HCC预后不良相关

通过分析TCGA数据库和多个HCC患者队列，发现Riplet基因启动子超甲基化导致其在HCC中表达下调，且与不良预后相关。Riplet低表达的HCC患者生存率较低，提示Riplet可能在HCC进展中起重要作用。

图2Riplet缺失促进HCC进展且依赖免疫微环境

Riplet基因敲除（Riplet^Δhep）小鼠在DEN/HFD或DEN/CCl4诱导的HCC模型中表现出更多的肿瘤数量和更大的肿瘤直径，且生存期缩短。单细胞RNA测序显示，Riplet缺失导致肿瘤中CD8 T细胞比例下降，功能受损，而对其他免疫细胞影响较小，表明Riplet缺失通过影响免疫微环境促进HCC进展。

图3Riplet缺失通过CD8 T细胞依赖性机制促进HCC进展

通过CD8和CD4 T细胞的耗竭实验，发现Riplet缺失对HCC进展的影响主要依赖于CD8 T细胞。Riplet缺失的HCC中，CD8 T细胞表现出更高的耗竭标志物表达，如PD-1、TIM-3和CD39，同时效应细胞因子（如IFN-γ和TNFα）的产生减少，表明Riplet缺失通过促进CD8 T细胞耗竭来促进HCC进展。

图4Riplet缺失通过增强FFA产生诱导CD8 T细胞耗竭

研究发现，Riplet缺失的HCC细胞中脂肪酸合成酶（FASN）活性增加，导致游离脂肪酸（FFAs）水平升高，特别是棕榈酸（PA/C16:0）。这些FFAs通过激活STAT3信号通路，促进CD8 T细胞的终末耗竭。使用CD36阻断抗体可以部分逆转这种效应，表明FFAs在Riplet缺失诱导的CD8 T细胞耗竭中起关键作用。

图5FFA积累通过激活STAT3诱导CD8 T细胞耗竭

实验表明，棕榈酸（PA/C16:0）处理的CD8 T细胞表现出更高的耗竭标志物表达和更低的效应细胞因子产生。PA/C16:0通过增强STAT3的棕榈酰化和膜定位，激活STAT3信号通路，进而促进TOX基因的表达，导致CD8 T细胞的终末耗竭。使用STAT3抑制剂可以逆转这一过程。

图6Riplet缺失通过增强FASN活性促进HCC进展

研究发现，Riplet与FASN相互作用，并通过K48连接的泛素化降解FASN。Riplet缺失导致FASN蛋白稳定性增加，脂肪酸合成增强，进而促进HCC细胞增殖和CD8 T细胞耗竭。使用FASN抑制剂C75可以逆转这些效应，表明FASN是Riplet调控HCC进展的关键下游靶点。

图7Riplet低表达HCC对PD-1阻断和FASN抑制剂联合治疗敏感

临床样本分析显示，Riplet低表达与HCC患者对PD-1免疫治疗的抵抗相关。在Riplet缺失的HCC小鼠模型中，PD-1阻断剂单独治疗无效，但与FASN抑制剂C75联合使用时，可以显著抑制肿瘤生长并提高生存率，表明联合治疗策略有望克服Riplet缺失HCC的免疫治疗抵抗。

【全文总结】

本研究深入探讨了E3泛素连接酶Riplet在肝细胞癌（HCC）中的作用机制，揭示了其通过调控脂肪代谢和CD8 T细胞耗竭影响HCC进展及免疫治疗抵抗的新机制。研究发现，Riplet在HCC中因启动子超甲基化而沉默，导致脂肪酸合成酶（FASN）介导的脂肪酸合成增强，特别是棕榈酸（PA/C16:0）的积累。这些脂肪酸通过激活STAT3信号通路，促进CD8 T细胞的终末耗竭，进而导致HCC对免疫治疗产生抵抗。通过使用FASN抑制剂C75，可以逆转这种耗竭状态，并与抗PD-1免疫治疗产生协同抗肿瘤效果，为HCC的治疗提供了新的策略和潜在的联合治疗靶点。

原文链接：

https://www.science.org/doi/10.1126/sciimmunol.ado3485

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