CAR-T细胞疗法通过基因修饰患者自身T细胞识别并杀伤肿瘤细胞，在急性淋巴细胞白血病（ALL）、大B细胞淋巴瘤（DLBCL）等复发难治性血液肿瘤治疗中取得突破。FDA及NMPA批准的CAR-T产品多为第二代CAR，包含CD28或4-1BB共刺激结构域提升T细胞活性与持久性。目前，自体CAR-T制备费时且依赖患者自身免疫细胞，限制了其广泛应用和疗效稳定性。为突破此瓶颈，基因编辑技术助力开发同种异体CAR-T细胞，利用健康供体T细胞经过遗传改造，建立“现成”细胞库，可快速用于多名患者，降低生产复杂度及成本，提高治疗可及性。

本文系统总结了基因编辑同种异体CAR-T细胞的最新进展，重点分析其安全性挑战（如移植物抗宿主病[GVHD]与宿主抗移植物反应[HVGR]）、关键基因编辑工具及临床试验数据，探讨未来转化方向。

同种异体CAR-T细胞主要面临GVHD与HVGR两大免疫安全风险。GVHD由供体T细胞通过其T细胞受体（TCR）识别宿主组织产生攻击，引发急慢性多器官损伤。基因编辑策略通过敲除TCR α链基因（TRAC）或β链基因（TRBC）抑制TCR表达，结合磁珠去除残余TCR阳性细胞，有效降低GVHD风险。然而，完全敲除TCR可能影响CAR-T体内存活和功能，需权衡优化。非αβT细胞如自然杀伤（NK）、γδT细胞、NKT细胞及细胞因子诱导杀伤（CIK）细胞等，因天然免疫特性而降低GVHD发生，逐渐成为研究热点。 HVGR源自宿主免疫系统对异体CAR-T细胞的识别与清除，主要由宿主T细胞识别供体细胞表面人类白细胞抗原（HLA）分子触发。基因编辑通过敲除β2-微球蛋白（B2M）阻断HLA-I表达，避免宿主T细胞攻击，但使CAR-T易被NK细胞识别。为此，融合B2M-HLA-E/G融合蛋白或保留部分非经典HLA分子增强逃逸NK细胞。针对HLA-II分子，敲除关键转录因子CIITA及相关基因降低其表达，减缓CD4⁺T细胞介导的排斥。CAR结构优化如表达免疫防御受体（ADR）亦能增强免疫耐受。

基因编辑技术概述

主流基因编辑工具包括蛋白指导的锌指核酸酶（ZFNs）、转录激活样效应核酸酶（TALENs）、天然内切酶（meganucleases）及RNA指导的CRISPR-Cas系统。其通过特异性诱导双链DNA断裂，启动非同源末端连接（NHEJ）或同源依赖修复（HDR）实现基因敲除/敲入。CRISPR-Cas9因设计简便、效率高被广泛应用，但需防范脱靶效应和染色体异常。新兴的碱基编辑（base editing）和精准编辑（prime editing）技术，无需产生双链断裂，降低基因组不稳定风险，成为未来趋势。

基因编辑的安全性管理

脱靶与基因组毒性是同种异体CAR-T应用的主要安全隐患。通用措施包括优化gRNA设计、使用高保真Cas9变体、缩短编辑暴露时间及采用核糖核蛋白递送系统。高灵敏度脱靶检测技术如DISCOVER-seq、PEAC-seq及单细胞多组学分析等，支持临床前及临床安全监控。长期随访发现CAR-T治疗后继发肿瘤风险增加，强调临床应用需严密监测和资料存档。

异体CAR-T细胞来源与亚群选择

异体CAR-T细胞主要来源包括供体外周血单个核细胞（PBMCs）、脐带血（UCB）及诱导多能干细胞（iPSCs）。 UCB T细胞具备更幼稚的免疫表型及低免疫原性，减少GVHD风险，但细胞量有限，需严格HLA匹配。iPSCs来源细胞具备无限扩增潜力和低免疫原性，且可实现均一化生产，但存在潜在肿瘤发生风险。 非传统T细胞亚群如γδT细胞、NKT细胞、CIK细胞及病毒特异性记忆T细胞（VSTs）展现天然免疫优势和低GVHD风险，部分已进入临床试验阶段，成为异体免疫细胞治疗的重要候选。

图：通用型异体CAR-T细胞的制备工艺与作用机制

基因递送平台创新

基因递送方法涵盖γ-逆转录病毒、慢病毒载体、转座子系统（如Sleeping Beauty、PiggyBac）、mRNA递送与DNA纳米载体等。近年来非整合性、低致突变风险的mRNA和DNA纳米载体技术迅速发展，为CAR-T生产提供安全高效的新路径。原位（in vivo）CAR-T细胞基因编辑技术通过靶向递送系统直接在体内转录表达CAR，极大缩短治疗周期、降低成本，并实现患者定制化，开启免疫治疗新纪元。

图：用于T细胞修饰的基因组编辑工具

临床试验进展

同种异体CAR-T细胞在血液肿瘤领域已取得显著疗效。针对CD19、CD22、BCMA、CD123、CD7及CD70等靶点的多款产品表现出良好安全性和抗肿瘤活性。多基因敲除（TRAC、CD52、B2M、PD-1等）结合优化的预处理方案推动疗效提升。 固态肿瘤中，TME的免疫抑制和细胞迁移障碍限制CAR-T疗效。基因编辑通过敲除TGFBR2、PD-1、Regnase-1等基因增强抗抑制能力，联合放疗、免疫检查点抑制剂和溶瘤病毒等多模态疗法，正成为研究热点。

未来展望

未来异体CAR-T发展方向包括：开发针对固态肿瘤高特异性新靶点（如Claudin18.2、GUCY2C、GPC3、ICAM-1）、多基因编辑策略提升细胞功能与耐受、结合精准免疫调节与代谢重编程，强化肿瘤穿透及持久杀伤能力。智能合成生物学设计可赋予CAR-T细胞环境感知与响应能力，实现靶向激活和微环境调控。 同时，原位CAR-T基因编辑技术将彻底革新治疗流程，降低治疗门槛，推动“现成即用”免疫细胞治疗走向临床常规。

原始出处

Su, J., Zeng, Y., Song, Z. et al. Genome-edited allogeneic CAR-T cells: the next generation of cancer immunotherapies. J Hematol Oncol 18, 90 (2025). https://doi.org/10.1186/s13045-025-01745-8

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Tags： 基因编辑破解安全瓶颈！J Hematol Oncol：同种异体 CAR-T 细胞疗法的突破与挑战