HBV感染是全球性的公共卫生问题，根据世界卫生组织发布的数据，全球约有2.57亿慢性HBV感染者，每年约88.7万人死于HBV感染所致的失代偿期肝硬化、肝衰竭、原发性肝癌等终末期肝病。根据我国2014年乙型肝炎血清流行病学调查结果估算，我国普通人群HBsAg流行率为5%～6%，仍有约7 000万慢性HBV感染者，2 000万～3 000万慢性乙型肝炎患者。虽然我国乙型肝炎相关肝病年病死人数从2016年的22.9万人降至2019年的16.2万人，年龄标准化病死率平均每年降低4.92%，但要实现世界卫生组织提出的“2030年消除病毒性肝炎威胁”的目标仍存在巨大挑战。

HBV后可导致不同的临床结局，包括急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎。慢性HBV感染自然史包括：免疫耐受期、免疫清除期、免疫控制期、再活动期。《慢性乙型肝炎防治指南（2022年版）》更新后，将免疫控制期定义为HBeAg阴性慢性HBV感染，即：HBsAg阳性但低于1 000 IU/mL、HBeAg阴性、HBV DNA持续未检出、ALT和AST水平持续正常、影像学检查无肝硬化征象、肝病理学检查无或仅有轻度炎症并可有不同程度的纤维化。由于HBeAg阴性慢性HBV感染者中HBsAg持续阳性，患者病情可发生进展，肝病相关死亡风险和原发性肝细胞癌发生风险分别是健康人群的2.1倍和4.6倍。HBeAg阴性慢性HBV感染者接受聚乙二醇干扰素α-2b（PEG-IFN-α-2b）治疗的有效性和安全性均良好，PEG-IFN-α-2b单药治疗72周时，84.2%（16/19）的HBeAg阴性慢性HBV感染者发生HBsAg阴转，68.4%（13/19）患者发生HBsAg血清学转换，所有患者均未发生治疗相关严重不良事件。既往有研究发现，慢性乙型肝炎患者接受替诺福韦酯抗病毒治疗过程中，随着病毒载量下降，HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞杀伤功能显著增强，且与HBeAg阴转密切相关。但有关HBeAg阴性慢性HBV感染者抗病毒治疗过程中HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞功能的变化罕见报道。因此，本研究观察了PEG-IFN-α-2b治疗后HBeAg阴性慢性HBV感染者HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞功能的变化，探寻抗病毒治疗对宿主细胞免疫的影响。

1资料与方法

1.1   研究对象

选取2020年4月—2022年6月于新乡医学院第一附属医院和空军军医大学唐都医院就诊的HBeAg阴性慢性HBV感染者53例。入选标准：（1）年龄18～60岁；（2）入组前1年内未接受抗病毒治疗和/或免疫调节治疗；（3）HBsAg阳性但低于1 000 IU/mL、HBeAg阴性；（4）HBV DNA<100 IU/mL；（5）ALT和AST水平正常；（6）影像学无肝硬化征象。排除标准：（1）合并其他肝炎病毒和/或HIV感染；（2）合并肝硬化、肝衰竭、原发性肝癌等终末期肝病；（3）合并酒精性肝病、药物性肝损伤等其他肝脏疾病；（4）合并自身免疫性疾病；（5）合并恶性肿瘤；（6）合并重要脏器（脑、肺、心脏、肾脏）功能不全；（7）妊娠期及哺乳期女性。

所有患者接受PEG-IFN-α-2b（厦门特宝生物工程股份有限公司）180 μg/周皮下注射治疗，并在基线、12周、24周、48周时分别进行常规采血随访，评估安全性和治疗应答情况，随访观察最长48周，在基线和研究终点（对于疗程<48周患者，HBsAg阴转定义为研究终点，对于疗程≥48周患者，PEG-IFN-α-2b治疗48周定义为研究终点）额外采集20 mL静脉血。

1.2   研究方法

1.2.1   试剂和仪器

人淋巴细胞分离液购自北京索莱宝生物技术公司；CD8⁺T淋巴细胞分选试剂盒购自德国美天旎公司；抗CD3/CD4/CD8荧光标记抗体、小鼠抗人CD8-FITC、小鼠抗人Fas配体（FasL）-PE、小鼠抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）-APC购自美国BD公司；抗穿孔素抗体、抗颗粒酶B抗体、抗IFN-γ抗体购自美国Abcam公司；酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒购自武汉华美生物技术公司；乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测试剂盒购自武汉碧云天公司；HBV核酸测定试剂盒（PCR-荧光探针法）购自广州达安基因股份有限公司（定量线性范围：100～5×10⁸ IU/mL）Transwell培养平板购自美国康宁公司；Trucount绝对计数管购自美国BD公司。FACS Calibur流式细胞仪为美国BD公司产品；酶联免疫斑点试验（ELISPOT）读板仪为德国AID公司产品；酶标仪为美国伯乐公司产品。

1.2.2   外周血单个核细胞（PBMC）分离

于清晨、空腹采集外周静脉血20 mL，乙二胺四乙酸二钠抗凝，2 h内使用人淋巴细胞分离液、采用密度梯度离心法分离PBMC，冻存于-80 ℃备用。

1.2.3   CD8⁺T淋巴细胞的纯化

使用CD8⁺T淋巴细胞分选试剂盒纯化PBMC中的CD8⁺T淋巴细胞。取10⁷个PBMC，4 ℃、400 r/min离心10 min，弃上清后加入40 μL缓冲液重悬细胞，再加入10 μL生物素标记的抗体鸡尾酒（包含抗人CD4、CD15、CD16、CD19、CD34、CD36、CD56、CD123、TCRγ/δ、CD235a抗体），4 ℃孵育5 min后，加入30 μL缓冲液和20 μL CD8⁺T淋巴细胞磁珠抗体鸡尾酒（包含抗人CD14、CD61、抗生物素抗体），4 ℃孵育10 min。将分离柱使用缓冲液充分浸润，置于磁力分离架上，将上述细胞悬液加入分离柱中，使细胞在重力作用下穿过分离柱，收集穿过分离柱的细胞即为纯化的CD8⁺T淋巴细胞。

1.2.4   CD8⁺T淋巴细胞与HepG2.2.15细胞共培养系统的建立

选择17例HLA-A*02限制性HBeAg阴性慢性HBV感染者（治疗结束时7例发生HBsAg阴转、10例未发生HBsAg阴转）的CD8⁺T淋巴细胞，与HepG2.2.15细胞建立共培养系统。直接接触共培养系统：2×10⁵个CD8⁺T淋巴细胞与10⁶个HepG2.2.15细胞直接混合培养，向培养液中加入HBV C基因型核心区多肽库（上海生工生物工程技术公司合成），每条多肽含有15个氨基酸，每条多肽之间有5个氨基酸重叠，共包含41条多肽，每条多肽的终浓度均为10 μg/mL。间接接触共培养系统：使用Transwell培养平板进行培养，将2×10⁵个CD8⁺T淋巴细胞置于上层小室，10⁶个HepG2.2.15细胞置于下层平板，两种细胞被直径为0.4 μm的滤膜分隔，仅可溶性细胞因子可穿过，向上层小室中加入HBV C基因型核心区多肽库。培养48 h后收集细胞和上清。

1.2.5   外周血T淋巴细胞计数检测

向Trucount绝对计数管中加入20 μL抗CD3/CD4/CD8荧光标记抗体和50 μL抗凝全血，避光孵育15 min。加入450 μL流式检测专用红细胞裂解液，孵育45 min后使用FACS Calibur流式细胞仪获取细胞，使用MultiSET软件对CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞进行绝对计数。

1.2.6   ELISPOT检测穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ的HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞频数

设立阳性对照组（植物血凝素，10 μg/mL）、阴性对照组（不加入刺激物）、实验组（加入HBV C基因型核心区多肽库，10 μg/mL），每组设立2个复孔。分别用抗穿孔素抗体、抗颗粒酶B抗体、抗IFN-γ抗体（0.5 μg/mL）各100 μL包被96孔板，4 ℃孵育过夜，刺激洗板、封闭。加入2×10⁵个PBMC，并加入相关刺激原，终体积200 μL，37 ℃、5% CO₂条件下培养16 h，洗板后每孔加入100 μL生物素标记的抗穿孔素抗体、抗颗粒酶B抗体、抗IFN-γ抗体，室温孵育1 h，洗板后每孔加入100 μL碱性磷酸酶标记的链球菌亲和素，室温避光孵育45 min，洗板后加入显色液，室温避光孵育15 min后加入终止液。使用ELISPOT读板仪读取斑点数，每一个斑点代表一个分泌细胞，计数斑点形成细胞（SFC）数，结果记录为“实验组SFC-阴性对照组SFC”，以“SFC/10⁶个PBMC”为单位，分析产生穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ的细胞数。

1.2.7   ELISA检测培养上清中穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ、TNF-α水平

向检测孔中加入上清液和倍比稀释的标准品各100 μL，同时设立空白对照，覆膜后37 ℃孵育1.5 h。弃液体，甩干，不洗涤，每孔中加入生物素化抗体工作液100 μL，覆膜后37 ℃孵育1 h。弃液体后洗涤5次，每孔中加入辣根过氧化物酶结合物工作液100 μL，覆膜后37 ℃孵育30 min。弃液体后洗涤5次，每孔中加入底物溶液90 μL，覆膜后37 ℃避光孵育15 min。每孔中加入终止液50 μL。立即使用酶标仪测定450 nm波长处的吸光度（A），根据标准品的A值绘制标准曲线，计算待测因子浓度。

1.2.8   靶细胞死亡检测

通过检测上清中LDH水平计算靶细胞死亡率。使用LDH细胞毒性检测试剂盒（武汉碧云天公司）检测培养上清中LDH水平，以HepG2.2.15细胞培养上清中LDH水平作为“低水平对照”（A_低水平），以Triton X-100处理的HepG2.2.15细胞培养上清中LDH水平作为“高水平对照”（A_高水平）。应用如下公式计算靶细胞死亡率=（A_实验-A_低水平）/（A_高水平-A_低水平）×100%。

1.2.9   流式细胞术检测CD8⁺T淋巴细胞中FasL和TRAIL表达

收集培养细胞，转入流式检测管中，洗涤后加入小鼠抗人CD8-FITC、小鼠抗人FasL-PE、小鼠抗人TRAIL-APC各5 μL，避光孵育30 min，洗涤2次后加入含有4%多聚甲醛的磷酸盐缓冲液固定，使用FACS Calibur流式细胞仪获取细胞，使用FlowJo软件分析结果。

1.2.10   HBV DNA定量检测

使用HBV核酸测定试剂盒（PCR-荧光探针法）对上清中HBV DNA进行检测。使用试剂盒中提供的DNA提取液Ⅰ提取上清中的DNA，将提取的20 μL DNA直接加入HBV-PCR反应管中，进行PCR反应。反应条件：93 ℃ 2 min，1个循环，93 ℃ 45 s、55 ℃ 1 min，10个循环，93 ℃ 30 s、55 ℃ 45 s，30个循环。反应结束后获得扩增曲线，分析结果。

2结果

2.1   一般资料和安全性分析

纳入53例HBeAg阴性慢性HBV感染者，男42例，女11例，平均年龄（28.81±8.64）岁，年龄范围18～60岁。所有患者HBsAg均低于1 000 IU/mL ［269.72（92.90～430.08） IU/mL］，ALT水平为（23.23±8.27）U/mL，AST水平为（28.51±7.91）U/mL。在研究终点时，30.19%（16/53）患者实现HBsAg阴转，其中2例患者在24周实现HBsAg阴转，14例患者在48周实现HBsAg阴转，3例患者发生HBsAg血清学转换。

PEG-IFN-α-2b治疗整体安全性良好，未发生严重不良事件，98.11%（52/53）的患者在治疗过程中出现发热症状，92.45%（49/53）的患者出现白细胞和/或血小板水平降低，90.57%（48/53）的患者出现ALT和/或AST水平升高，未发生因不良反应所导致停药发生。

2.2   PEG-IFN-α-2b治疗对外周血T淋巴细胞数量的影响

CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞数量在基线和研究终点时，差异均无统计学意义（P值均>0.05）（表1）。CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞数量在研究终点时，发生HBsAg阴转和未发生HBsAg阴转的患者间差异亦均无统计学意义（P值均>0.05）（表2）。

2.3   PEG-IFN-α-2b治疗对HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞分泌穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ的影响

在研究终点时，HBeAg阴性慢性HBV感染者HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞分泌穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ的水平较基线时均显著升高（P值均<0.001）（表3）。在研究终点时，发生HBsAg阴转的HBeAg阴性慢性HBV感染者HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞分泌穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ的水平均显著高于未发生HBsAg阴转患者（P值均<0.01）（表4）。

2.4   PEG-IFN-α-2b治疗对HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞杀伤功能的影响

无论是基线还是研究终点，直接接触共培养系统中HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞诱导靶细胞死亡的比例、上清中穿孔素和颗粒酶B的水平均显著高于间接接触共培养系统（P值均<0.05），但HBV DNA、IFN-γ和TNF-α水平在直接接触与间接接触共培养系统之间的差异均无统计学意义（P值均>0.05）（表5）。在直接接触共培养系统中，研究终点时，HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞诱导靶细胞死亡的比例高于基线（P=0.030），上清中HBV DNA水平显著低于基线（P<0.001），上清中穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ和TNF-α水平均显著高于基线（P值均<0.05）。在间接接触共培养系统中，研究终点时上清中HBV DNA水平显著低于基线（P<0.001），上清中IFN-γ和TNF-α水平显著高于基线（P值均<0.05）。直接接触和间接接触共培养系统中，基线和研究终点时CD8⁺T淋巴细胞中FasL和TRAIL表达的典型流式分析图见图1。无论在直接接触还是间接接触共培养系统中，CD8⁺T淋巴细胞中FasL和TRAIL的平均荧光强度（MFI）在基线与研究终点时的差异均无统计学意义（P值均>0.05）（表5）。

图1  CD8⁺T淋巴细胞中FasL和TRAIL表达的典型流式分析图

在直接接触共培养系统中，研究终点时，发生HBsAg阴转的患者HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞诱导靶细胞死亡的比例高于未发生HBsAg阴转患者（P=0.002），上清中HBV DNA水平显著低于未发生HBsAg阴转患者（P=0.046），上清中穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ和TNF-α水平均显著高于未发生HBsAg阴转患者（P值均<0.05）。在间接接触共培养系统中，研究终点时，发生HBsAg阴转的患者上清中HBV DNA水平显著低于未发生HBsAg阴转患者（P=0.020），上清中IFN-γ和TNF-α水平显著高于未发生HBsAg阴转患者（P值均<0.05）。无论在直接接触还是间接接触共培养系统中，CD8⁺T淋巴细胞中FasL和TRAIL的MFI在发生HBsAg阴转与未发生HBsAg阴转患者的差异均无统计学意义（P值均>0.05）（表6）。

3讨论

HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞是机体清除病原体感染的重要免疫细胞之一，但慢性病毒感染中存在CD8⁺T淋巴细胞功能衰竭，诱发机体免疫耐受，无法有效清除病原体，导致感染慢性化。IFN-α具有抗病毒和免疫调节的双重作用，在优势人群中可实现持续免疫控制，实现HBsAg阴转和HBsAg血清学转换，进而实现慢性乙型肝炎功能性治愈。印度的一项研究发现，HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者在实现病毒学应答后停用核苷（酸）类似物（NUC）治疗，40%（22/55）的患者在6个月内出现肝炎复发（HBV DNA≥2 000 IU/mL且ALT≥2倍正常值上限），对复发患者使用PEG-IFN-α-2b治疗48周后约27%（6/22）患者实现HBsAg阴转，伴有CD8⁺T淋巴细胞、B淋巴细胞和趋化因子分泌增多，HBV特异性T淋巴细胞分泌IFN-γ、TNF-α和IL-21水平升高，表明PEG-IFN-α-2b治疗可增强慢性乙型肝炎患者HBV特异性T淋巴细胞活性。表达免疫检查点分子淋巴细胞活化基因-3（LAG3）的红系祖细胞可通过LAG3和转化生长因子β介导的信号通路抑制抗原提呈细胞功能，进而抑制HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞活性，导致慢性乙型肝炎患者对PEG-IFN-α-2b治疗应答不佳。亦有研究发现，对于NUC经治患者换用PEG-IFN-α治疗后，19.88%（33/166）发生病毒学突破，发生病毒学突破的患者主要表现为单核细胞中Toll样受体2表达降低、HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞中程序性死亡受体-1表达升高，机体免疫功能不全可能是造成NUC经治患者换用PEG-IFN-α后疗效不佳的重要原因之一。为此，有学者提出，对于PEG-IFN-α-2b治疗应答不佳的患者，序贯小剂量IL-2治疗24周可增加HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞的频数和功能，促进HBeAg血清学转换，改善临床结局。因此，HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞的功能与慢性乙型肝炎患者PEG-IFN-α-2b治疗的应答情况密切相关。HBeAg阴性慢性HBV感染者亦存在HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞功能衰竭，但有关HBeAg阴性慢性HBV感染者接受PEG-IFN-α-2b治疗后HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞功能变化的研究较少。

本研究纳入53例HBeAg阴性慢性HBV感染者，接受PEG-IFN-α-2b治疗，最长随访观察周期为48周，结果发现，研究终点时HBsAg阴转率为30.19%（16/53），这与既往HBeAg阴性慢性HBV感染者接受PEG-IFN-α-2b治疗48周时HBsAg阴转率相似，治疗过程中未发生治疗相关的严重不良事件，表明PEG-IFN-α-2b治疗HBeAg阴性慢性HBV感染者的有效性和安全性均良好。本研究结果显示，HBeAg阴性慢性HBV感染者外周血CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞计数在基线和治疗结束时并无统计学差异，这与既往Zhu等研究发现慢性乙型肝炎患者接受PEG-IFN-α-2a治疗52周时CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞比例降低的结果不一致。笔者认为此差异可能与以下因素相关：（1）本研究纳入的是HBeAg阴性慢性HBV感染者，Zhu等研究纳入的是慢性乙型肝炎患者，虽然两类患者均为慢性HBV感染者，但可能存在不同的免疫状态；（2）本研究的治疗策略为PEG-IFN-α-2b，Zhu等研究的治疗策略为PEG-IFN-α-2a，两者在药物剂型、耦合PEG分子大小等方面存在差异；（3）本研究的观察指标是T淋巴细胞绝对计数，Zhu等研究的观察指标是T淋巴细胞比例，两者观察指标上的差异可能造成结果不一致。因此，本研究结果提示PEG-IFN-α-2b治疗可能并未影响HBeAg阴性慢性HBV感染者外周血T淋巴细胞数量。

HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞可通过双重途径发挥杀伤功能。一方面，HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞可通过穿孔素、颗粒酶等细胞毒性分子以及FasL、TRAIL介导的凋亡信号通路诱导靶细胞死亡，清除病毒感染，这一过程依赖细胞之间的直接接触。另一方面，HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞还可通过分泌促炎因子（主要为IFN-γ和TNF-α）抑制病毒复制，但这一过程并不依赖细胞间直接接触，也不会造成严重细胞死亡。Phillips等建立了HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞与HepG2.2.15细胞的直接接触（直接混合培养）和间接接触（使用Transwell平板培养）共培养系统，在直接接触共培养系统中，HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞可通过直接细胞杀伤和分泌细胞因子发挥抑制HBV复制的作用，在间接接触共培养系统中，HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞仅通过分泌细胞因子发挥抑制HBV复制。本研究利用此培养系统对HBeAg阴性慢性HBV感染者HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞的功能进行了分析，直接接触培养体系中CD8⁺T淋巴细胞诱导靶细胞死亡的比例显著高于间接接触培养体系，但无论是基线还是研究终点，HBV DNA水平在直接接触和间接接触共培养中的差异无统计学意义，直接接触共培养中细胞毒性分子水平升高，但IFN-γ和TNF-α水平与间接接触共培养中水平相似，这与既往的研究结果一致。这一方面提示HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞可能主要通过分泌细胞毒性分子诱导靶细胞死亡，这一过程依赖CD8⁺T淋巴细胞与靶细胞直接接触；另一方面，HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞主要通过分泌细胞因子抑制HBV DNA复制，而这一过程并不依赖CD8⁺T淋巴细胞与靶细胞的直接接触，亦不诱导明显的靶细胞死亡。

本研究结果显示，PEG-IFN-α-2b治疗后，HBeAg阴性慢性HBV感染者HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞分泌穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ的水平升高，这一升高过程在发生HBsAg阴转的患者中更为明显，这与既往使用替诺福韦酯抗病毒治疗患者中的发现一致。利用共培养系统评估发现，一方面，PEG-IFN-α-2b治疗后可增强直接接触培养体系中CD8⁺T淋巴细胞的杀伤功能，表明PEG-IFN-α-2b治疗可增强HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞介导的直接细胞杀伤活性；另一方面，虽然PEG-IFN-α-2b治疗对间接接触共培养体系中CD8⁺T淋巴细胞介导的细胞杀伤功能并无影响，但可显著增加IFN-γ和TNF-α分泌，对病毒复制的抑制作用增强，表明PEG-IFN-α-2b治疗可增强HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞通过分泌细胞因子介导的HBV复制的抑制。此外，PEG-IFN-α-2b治疗对总CD8⁺T淋巴细胞中FasL和TRAIL的表达并无明显影响，提示PEG-IFN-α-2b可能主要通过增强细胞毒性分子分泌促进HBeAg阴性慢性HBV感染者HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞的杀伤功能，通过增加细胞因子分泌促进HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞对病毒复制的抑制。进一步分析则发现，直接接触共培养系统中，发生HBsAg阴转患者HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞介导的靶细胞死亡比例高于未发生HBsAg阴转患者，在直接接触和间接接触共培养系统中，发生HBsAg阴转患者HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞诱导的病毒抑制均高于未发生HBsAg阴转患者，提示发生HBsAg阴转的患者HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞活性显著增强，可能成为促进HBsAg阴转的重要因素之一。

本研究具有一定的局限性。一方面，纳入的受试者数量有限，基于伦理学方面考虑，并未在每个观察时间点对患者进行血液样本的额外采集，未观察到PEG-IFN-α-2b治疗期间HBeAg阴性慢性HBV感染者HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞功能的动态变化。同时，《慢性乙型肝炎防治指南（2022版）》推荐使用高灵敏度检测技术检测HBV DNA（定量下限为10～20 IU/mL），而本研究的时间为2020—2022年，纳入HBeAg阴性慢性HBV感染者的HBV DNA<100 IU/mL。后期还需要扩大样本量进一步证实本研究结果。另一方面，本研究仅开展体外实验，后期需要利用HBV感染动物模型，观察PEG-IFN-α- 2b在体内对HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞功能的调控作用。

综上所述，PEG-IFN-α-2b治疗HBeAg阴性慢性HBV感染者可获得较高的HBsAg阴转率，PEG-IFN-α-2b治疗还可显著增强HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞杀伤功能和抑制病毒复制的活性，这一过程与HBsAg阴转密切相关。

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https://www.lcgdbzz.org/cn/article/doi/10.12449/JCp50406

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