头颈部鳞癌（HNSCC）年发病超过80万例，5年生存率仅为60%，顺铂耐药是主要瓶颈。CCT复合物是真核生物II类伴侣蛋白家族成员，由8个同源亚基组成，CCT与细胞蛋白质组中5-10%的蛋白质存在相互作用，并包括多种癌蛋白。其亚基CCT2在多种癌症中高表达且与预后不良相关，但其在头颈鳞癌中的作用机制不明。c-Myc作为关键致癌因子，直接靶向成药困难，故而靶向其上游调控蛋白或可成为新策略。此外，化疗诱导的凋亡囊泡可能通过传递相关分子促进肿瘤恶性进展。本研究重点探讨：1）CCT2是否通过稳定c-Myc驱动头颈鳞癌进展及耐药；2）凋亡囊泡是否通过传递CCT2传播耐药性。

1.CCT2在头颈鳞癌中高表达且与不良预后相关

通过对多个独立数据库的分析，发现CCT2在头颈鳞癌组织中显著高表达（图1A-B），且与不良预后相关（图1C-E）。对头颈鳞癌肿瘤样本的免疫组化结果也显示相较于癌旁正常组织，肿瘤组织呈现CCT2高表达，并与肿瘤增殖活性呈正相关（图1F）。进一步分析发现，CCT2表达水平与肿瘤临床分期显著相关（图1G）。在头颈鳞癌组织和多种头颈鳞癌细胞系中，CCT2 mRNA和蛋白水平的表达均显著高于正常细胞（图1H-J）。这些结果证实了CCT2在头颈鳞癌中的异常高表达特征，并揭示了其与肿瘤进展和不良预后的相关性。

图1 CCT2在头颈鳞癌中的表达情况及其与预后的相关性（原文中Figure 1）

2.CCT2促进肿瘤增殖和细胞周期进展

在体外实验中，本研究选择不同CCT2表达水平的HSC-3和SAS细胞系，通过shRNA成功构建CCT2敲低模型（图2A&B）。功能实验表明，CCT2敲低显著抑制了肿瘤细胞的增殖能力和克隆形成潜能（图2C&D）。进一步机制研究发现，CCT2敲低导致细胞周期发生G1/S期阻滞（图2E），并调控了Cyclin D1、Cyclin E1和p21等关键周期调控蛋白的表达（图2F）。在体内实验中，CCT2敲低的移植瘤体积显著减小，生长速率明显降低（图2G-I）。免疫组化分析显示肿瘤组织中增殖标志物Ki-67表达显著下调，与体外实验结果一致（图2J）。这些发现证实了CCT2通过调控细胞周期进程促进头颈鳞癌增殖的重要作用。

图2 CCT2对头颈鳞癌增殖能力的影响（原文中Figure 2）

3.增强迁移、侵袭及EMT过程

通过Transwell小室实验发现，敲低CCT2显著抑制了HSC-3和SAS细胞的迁移和侵袭能力(图3A)。划痕实验进一步证实，CCT2敲低延缓了伤口愈合速度，表明细胞迁移能力受损(图3B)。为更真实模拟肿瘤微环境，研究采用三维肿瘤球迁移实验，结果显示CCT2敲低组的肿瘤球迁移面积显著减小(图3C)。单细胞运动轨迹分析也观察到CCT2敲低细胞的运动速度明显降低(图3D)。机制研究表明，CCT2敲除导致上皮标志物E-cadherin表达升高，间质标志物N-cadherin、Vimentin和Slug表达降低(图3E)。这些发现证实CCT2通过促进EMT进程增强头颈鳞癌细胞的迁移和侵袭能力。

图3 CCT2敲低抑制了头颈鳞癌的侵袭和迁移（原文中Figure 3）

4.CCT2通过稳定c-Myc驱动顺铂耐药

研究发现，CCT2表达水平与头颈鳞癌细胞对顺铂的敏感性呈显著负相关：CCT2高表达的HSC-3细胞耐药性最强，而低表达的SAS细胞最敏感（图4A-C）。敲低CCT2可显著增强顺铂诱导的细胞凋亡（图4D），在动物模型中，CCT2敲低联合顺铂治疗显著抑制肿瘤生长（图4E-F）。分子机制研究表明，CCT2与c-Myc直接相互作用并延长其蛋白半衰期（图4G-K）。CCT2高表达导致c-Myc信号通路活化，并上调PCNA、CCND1等细胞周期相关蛋白的表达（图4L）。功能实验证实，c-Myc敲低亦可导致细胞周期阻滞、迁移能力下降和药物敏感性增加（图4M&N）。

图4 CCT2介导顺铂耐药的机制（原文中Figure 5）

5.凋亡囊泡传递CCT2，介导耐药性扩散

本研究提取了顺铂诱导的HSC-3细胞来源的凋亡囊泡（图5A）。这些直径约226 nm的凋亡囊泡被顺铂敏感的受体细胞SAS摄取后，通过上调c-Myc及细胞周期蛋白的表达，加速细胞周期进程(图5I)，从而增强SAS对顺铂的抵抗能力。CCT2敲低可显著削弱凋亡囊泡的耐药传递功能（图5J-L）。表明凋亡囊泡通过包裹CCT2向顺铂敏感细胞传递耐药性（图5M）。

图5 凋亡囊泡传递CCT2扩散顺铂耐药性（原文中Figure 7）

总之，本研究阐明了CCT2-c-Myc轴在头颈鳞癌中的关键作用，并提出凋亡囊泡介导的非遗传性耐药新机制。结果表明，靶向CCT2或阻断凋亡囊泡的传递，可能为克服头颈鳞癌耐药提供新策略。进一步研究发现，CCT2通过稳定c-Myc促进头颈鳞癌进展及顺铂耐药，并首次揭示凋亡囊泡可介导CCT2的水平转移，从而扩大耐药细胞群体。基于上述发现，CCT2有望成为改善头颈鳞癌治疗效果的潜在新靶点。

文章来源

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https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2352304225002843

引用这篇文章：

Lu L, Shen Y, Li X, et al. CCT2 enhances c-Myc stabilization to drive tumor progression and chemoresistance in head and neck squamous cell carcinoma. Genes Dis. In Press.

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