糖尿病（DM）是一种代谢紊乱症，其特征为胰岛素作用或分泌不足，或两者兼而有之。该病与多种并发症紧密相关，包括糖尿病肾病、视网膜病变、足部病变以及认知功能障碍。糖尿病性脑病（DE）是一种以认知功能缺陷和脑部结构病理变化为特征的神经退行性疾病，该病显著影响患者的日常生活和生活质量。目前，针对DE的临床治疗主要涉及生活方式的调整以控制血糖水平，如改善饮食习惯和增加体育活动，以及认知康复训练，但目前尚缺乏有效的治疗策略。现代医学研究揭示，慢性炎症是糖尿病并发症发展和恶化的重要因素，其中也包括糖尿病相关的认知功能障碍。

传统中药（TCM）因其包含多种成分、作用靶点和治疗途径的优点，被广泛用于治疗DM及其相关并发症。黄连解毒汤（HLJDD），作为一种清热剂，具备清热解毒的疗效。传统医学亦将其用于DM和阿尔茨海默病的治疗，HLJDD在基础研究和临床应用中已被证实对多种疾病具有治疗效果。尽管如此，HLJDD在治疗DE方面的具体作用及其潜在机制尚未完全明了。

日前，一篇名为“Huang-Lian-Jie-Du Decoction alleviates diabetic encephalopathy by regulating inflammation and pyroptosis via suppression of AGEs/RAGE/ NF-κB pathways”的文章探讨了HLJDD对改善DE小鼠认知功能障碍的有益作用。

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HLJDD改善DE小鼠的认知功能障碍并降低血糖异常

Morris水迷宫实验被用于评估小鼠的学习与记忆能力（图2A）。定位导航测试阶段（图2B-D），模型组（Mod组）在实验初期及末期的运动轨迹显得复杂且不明确，与对照组（Con组）相比，其逃避潜伏期显著缩短（P<0.05），表明DE模型构建成功。经HLJDD处理后，第五天的导航路径变得更为直接和清晰，与Mod组相比，逃避潜伏期显著降低（P<0.05）。空间探索测试显示（图2E），Con组和HLJDD组（HLL和HLH）在目标象限内的停留时间显著长于Mod组（P<0.05）。因此，结果表明，HLJDD能够显著提升DM小鼠的学习与记忆能力。同时，Mod组的空腹血糖（FBG）水平高于Con组，而HLJDD处理后这些水平显著下降（P<0.05）（图2F）。

图2 HLJDD治疗可改善DE小鼠的认知功能障碍，调节糖脂代谢紊乱

HLJDD减轻DE小鼠神经细胞损伤

在对脑组织进行HE和尼氏染色检查时（图3），Con组小鼠的海马（CA1、CA3、DG）及皮质区域未见明显病理改变。然而，在Mod组中，神经元细胞呈现固缩状态，核染色加深，与Con组相比，神经元细胞数量显著减少（P<0.05）。HLJDD对改善神经元细胞的病理状态具有积极作用，且其数量显著增加（P<0.05）（图3D-G）。这些结果表明，HLJDD具备增强DE小鼠神经元细胞结构和增加神经元细胞数量的潜能。TUNEL染色结果显示，Mod组萎缩细胞计数显著上升，染色呈阳性，表明凋亡现象加剧（图3B）。相对而言，Con组和HLJDD处理组中TUNEL阳性细胞数量最少，表明HLJDD能够减轻DE小鼠的神经元凋亡。

图3 HLJDD治疗可改善DE小鼠的神经元损伤和结肠损伤

HLJDD降低DE小鼠脑中GFAP和Iba-1的表达

为深入探究DE小鼠神经炎症的存在状况以及HLJDD的治疗效果，研究在海马和黑质区域对脑组织进行了免疫荧光分析。结果显示，与Con组相比，Mod组中星形胶质细胞标志物GFAP的表达水平显著上升，小胶质细胞标记物Iba-1的表达水平亦显著增加（P<0.05）（图4A-C）。经过HLJDD处理后，DE小鼠的GFAP水平显著下降（P<0.05），同时DE小鼠的Iba-1表达亦显著减少（P<0.05）。结果表明，HLJDD可能通过降低GFAP和Iba-1水平，减轻神经炎症，从而对糖尿病认知障碍具有潜在的改善作用。

图4 HLJDD治疗通过减少DE小鼠的神经炎症来恢复多巴胺能神经元缺陷

HLJDD降低DE小鼠血浆和脑中的炎症因子水平

与正常小鼠相比，Mod组血浆中的炎症标志物LPS水平显著升高（P<0.05）（图4D），IL-1β、IL-6和IL-18水平亦显著高于正常小鼠（P<0.05）（图4E-G），表明DE小鼠存在神经炎症。正如预期，经过HLJDD处理后，这些炎症标志物的水平显著降低（P<0.05）。

HLJDD抑制DE小鼠脑内AGE/RAGE/NF-κB通路

众多研究揭示，非酶糖化反应导致的高级糖化终产物（AGEs）在大血管和微血管损伤的进展中扮演了关键角色。这些反应涉及还原糖与蛋白质及脂质上的氨基反应位点的相互作用。进一步的研究指出，大脑微血管内皮细胞相较于主动脉中的微血管内皮细胞，更易受到与AGEs相关的炎症性损伤。如图5C所展示，DE小鼠脑组织中AGEs的浓度显著上升（P<0.01，P<0.05）。经过不同剂量的HLJDD处理后，脑组织中AGEs的累积显著减少（P<0.01，P<0.05）。免疫荧光（图5A）和蛋白质印迹分析（图5D）显示，与Con组相比，Mod组脑内p-NF-κBp65的表达水平、p-NF-κBp65与NF-κBp65的比率以及RAGE的表达显著提高。然而，在图5F中，HLL和HLH组的水平显著降低（P<0.05）。此外，Mod组的GLO1表达明显低于Con组，而经HLJDD处理后，GLO1蛋白表达显著增加（图5G）。

图5 HLJDD通过抑制AGEs/RAGE/NF-κB通路来减轻神经炎症

HLJDD抑制DE小鼠脑内AGE/RAGE/NF-κB通路

为探究HLJDD对DE小鼠病情缓解的作用机制，研究对焦亡相关标志物（包括NLRP3、GSDMD、N-GSDMD、切割型caspase-1、caspase-1、IL-1β、IL-6和IL-18）的表达水平进行了测定。结果显示，DE小鼠体内NLRP3、N-GSDMD与GSDMD的比例以及切割型caspase-1与caspase-1的比例均显著上升。然而，HLJDD的施用显著抑制了这些指标的异常升高，并呈现出明显的剂量反应关系。进一步的免疫组织化学分析揭示，HLJDD的施用导致NLRP3水平下降（图6A、B）。研究还发现，HLJDD显著降低了N-GSDMD与GSDMD的比例（图6E），以及切割型caspase-1与caspase-1的比例（图6G）。综上可得出结论，HLJDD通过抑制AGEs/RAGE/NF-κB通路，调节炎症和焦亡过程，对DE小鼠产生了积极的治疗效果。

图6 HLJDD通过抑制AGEs/RAGE/NF-κB通路来减轻细胞焦亡

结论

总之，HLJDD能够通过调整羰基化合物的代谢谱，改善羰基应激状况，抑制AGEs/RAGE/NF-κB信号通路，进而减轻羰基应激、神经炎症及细胞焦亡现象，对DE产生积极影响，为DE的新型治疗策略提供了新的视角。

参考文献：

Zhuang GD, Deng SM, Chen MD, Deng CF, Gu WT, Wang SM, Tang D. Huang-Lian-Jie-Du Decoction alleviates diabetic encephalopathy by regulating inflammation and pyroptosis via suppression of AGEs/RAGE/NF-κB pathways. J Ethnopharmacol. 2025 Jan 30;337(Pt 1):118787. doi: 10.1016/j.jep.2024.118787

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